Cellules ARPE-19 – Aperçu détaillé de la recherche sur les cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien avec les cellules ARPE-19
Les cellules ARPE-19 sont des cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien d’origine humaine issues d’une immortalisation spontanée. Elles sont utilisées pour étudier divers aspects de la biologie rétinienne, des conditions pathologiques et des interventions thérapeutiques (pharmacologie). Cet article vise à fournir des informations complètes sur les cellules immortalisées ARPE-19. Il abordera principalement les caractéristiques générales, les conditions de culture et les diverses applications de recherche de cette lignée cellulaire. Ainsi, en lisant cet article, vous acquerrez une compréhension approfondie des éléments suivants :
- Milieu de croissance
- Le milieu DMEM ou le milieu F12 de Ham est utilisé pour cultiver la lignée cellulaire ARPE-19. Le milieu ARPE-19 est enrichi de 5 % de sérum fœtal bovin (FBS), de 3,1 g/L de glucose, de 15 mM d’HEPES, de 1,6 mM de L-glutamine, de 1,0 mM de pyruvate de sodium et de 1,2 g/L de NaHCO₃. Le milieu est remplacé 2 à 3 fois par semaine.
- Temps de doublement
- Le temps de doublement des cellules ARPE-19 est d’environ 55 à 65 heures. Elles peuvent subir jusqu’à 48 doublements de population.
- Type de croissance
- ARPE-19 est une lignée cellulaire adhérente.
- Niveau de biosécurité
- BSL-1
- Disponible auprès de
- Cytion — Commander des cellules ARPE-19
- Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
- Lignée cellulaire ARPE-19 : Renseignements sur la culture
- Avantages et limites des cellules ARPE-19
- Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 en recherche
- Cellules ARPE-19 : publications de recherche
- Ressources pour la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
- Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
- Lignée cellulaire ARPE-19 : Renseignements sur la culture
- Avantages et limites des cellules ARPE-19
- Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 en recherche
- 5. Cellules ARPE-19 : publications de recherche
- Ressources sur la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
- Foire aux questions
Cellules ARPE-19 : origine et caractéristiques générales
Il est essentiel de connaître l’origine et les caractéristiques générales d’une lignée cellulaire pour pouvoir l’utiliser efficacement en recherche. Cette section de l’article présente toutes les informations relatives à la lignée cellulaire ARPE. Par exemple : Qu’est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19? Pourquoi utiliser les cellules ARPE-19? Qu’est-ce que la lignée cellulaire ARPE-19/HPV-16? Les cellules ARPE-19 sont-elles immortelles? Quelle est la morphologie et la taille des cellules ARPE-19?
- La lignée de cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes immortalisées, ARPE-19, a été dérivée des yeux d’un homme de 19 ans décédé des suites d’un traumatisme crânien lors d’un accident. Elle a été établie par Amy Aotaki-Keen en 1986.
- Ces cellules expriment des marqueurs des cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien, à savoir CRALBP et RPE-65, ce qui suggère qu’elles peuvent former des monocouches stables caractérisées par une polarité morphologique et fonctionnelle.
- Les cellules ARPE-19 présentent une morphologie de type cellulaire épithélial.
- Les cellules ARPE-19 présentent pour la plupart un caryotype normal, à l’exception d’une délétion et d’une addition sur le bras long des chromosomes 9 et 19, respectivement. De plus, certaines aneuploïdies sont également observées [1].
Lignée cellulaire ARPE-19 : Renseignements sur la culture
Les renseignements de base sur la culture cellulaire sont essentiels pour manipuler et entretenir correctement une lignée cellulaire. Cette section vous aidera à comprendre les points clés de la culture de la lignée cellulaire ARPE-19. Vous apprendrez : quel est le temps de doublement de la lignée ARPE-19? Quelle est la densité d’ensemencement de la lignée ARPE-19? Quelle est la densité cellulaire de la lignée ARPE-19? Quel est le milieu de congélation de la lignée ARPE-19? Comment cultiver la lignée cellulaire ARPE-19?
Points clés pour la culture des cellules ARPE-19
Temps de doublement de la population :
Le temps de doublement des cellules ARPE-19 est d’environ 55 à 65 heures. Elles peuvent subir jusqu’à 48 doublements de population.
Adhérentes ou en suspension :
ARPE-19 est une lignée cellulaire adhérente.
Rapport de repiquage :
Le rapport de sous-culture de l’ARPE-19 est de 1:3 à 1:5. Les cellules adhérentes sont rincées avec du PBS 1x et incubées avec une solution de dissociation, l’Accutase, pendant 8 à 10 minutes. Les cellules détachées sont ajoutées à un milieu frais, puis centrifugées. Le culot cellulaire est à nouveau remis en suspension et versé dans un flacon de culture contenant du milieu frais.
Milieu de croissance :
On utilise du milieu DMEM ou du milieu F12 de Ham pour cultiver la lignée cellulaire ARPE-19. Le milieu ARPE-19 est enrichi de 5 % de sérum fœtal bovin (FBS), de 3,1 g/L de glucose, de 15 mM d’HEPES, de 1,6 mM de L-glutamine, de 1,0 mM de pyruvate de sodium et de 1,2 g/L de NaHCO₃. Le milieu est remplacé 2 à 3 fois par semaine.
Conditions de culture :
Les cellules ARPE-19 sont conservées dans un incubateur humidifié à une température de 37 °C avec un apport de 5 % de CO₂.
Conservation :
La lignée cellulaire peut être conservée en phase vapeur d’azote liquide ou à une température inférieure à -150 °C afin de préserver la viabilité des cellules à long terme.
Procédure de congélation et milieu :
On utilise le CM-1 ou le CM-ACF comme milieu de congélation pour les cellules ARPE-19. En bref, les cellules sont congelées selon une méthode de congélation lente qui ne permet qu’une baisse de température de 1 °C par minute et protège les cellules contre le choc thermique.
Procédure de décongélation :
Les cellules sont décongelées dans un bain-marie préréglé à 37 °C. Lorsqu’il ne reste plus qu’un petit morceau de glace, les cellules sont ajoutées à un milieu de culture frais, puis centrifugées. Cela permet d’éliminer les résidus du milieu de congélation. Ensuite, le culot cellulaire est remis en suspension, et les cellules sont transférées dans un flacon pour la culture.
Niveau de biosécurité :
Les cellules ARPE-19 sont manipulées dans des laboratoires de niveau de biosécurité 1.
Avantages et limites des cellules ARPE-19
Les cellules ARPE-19 sont largement utilisées dans les études de biologie cellulaire rétinienne. Comme d’autres cellules, elles présentent également certains avantages et certaines limites. En voici quelques-uns :
Avantages
Les principaux avantages de la lignée cellulaire ARPE-19 sont les suivants :
Modèle de cellule rétinienne
Les cellules ARPE-19 ressemblent étroitement aux cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien humain, ce qui les rend idéales pour l’étude des maladies rétiniennes et les essais de médicaments.
Taux de croissance stable
Ces cellules présentent une croissance stable et peuvent être maintenues sur de longues périodes, ce qui facilite la réalisation d’expériences à long terme.
Facilité de transfection
La lignée cellulaire ARPE-19 est un excellent hôte de transfection, largement utilisé dans les études d’expression tant transitoire que stable.
Limites
Voici quelques limites associées à la lignée cellulaire ARPE-19 :
Différenciation limitée
La différenciation des cellules ARPE-19 est limitée par rapport à celle des cellules rétiniennes primaires. Cela pourrait avoir une incidence sur certaines études liées à la différenciation.
Applications de la lignée cellulaire ARPE-19 en recherche
La lignée cellulaire ARPE-19 présente de nombreuses applications dans la recherche sur la rétine. Nous avons abordé ici certaines utilisations spécifiques et importantes de cette lignée de cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien dans le cadre de la recherche.
- Recherche sur les maladies rétiniennes : Les cellules ARPE-19 fournissent des renseignements précieux sur la pathogenèse rétinienne. Les chercheurs utilisent ces cellules pour étudier les mécanismes pathologiques et les traitements potentiels. Une étude menée en 2020 a révélé que l’ARN circulaire hsa_circ_0041795 interagit avec le miARN-646 et le VEGFC pour favoriser les lésions induites par une glycémie élevée dans les cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien humain ARPE-19. Par conséquent, l’étude propose cet ARN circulaire comme cible thérapeutique et diagnostique efficace pour lutter contre la rétinopathie diabétique [2]. De même, Jing Yang et ses collègues ont utilisé des cellules ARPE-19 et ont apporté des éclairages sur la pathogenèse de la rétinopathie diabétique. Ils ont démontré que l’inhibition de l’ARN lnc SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) permet de supprimer la réponse inflammatoire et la transition épithélio-mésenchymateuse des cellules ARPE-19 traitées à une concentration élevée de glucose [3].
- Essais cliniques : Les cellules ARPE-19 sont utilisées pour évaluer l’efficacité et l’innocuité des médicaments et des composés, ce qui contribue au développement de traitements ou de thérapies pour les maladies rétiniennes. Par exemple, une étude menée en 2019 a mis en évidence les effets protecteurs des composés bioactifs de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d’hydrogène dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19 [4]. Par la suite, une étude a mis en évidence le rôle thérapeutique de l’extrait de Prunella vulgaris var. L contre les lésions induites par la lumière bleue chez les cellules ARPE-19 et dans un modèle murin [5].
5. Cellules ARPE-19 : Publications de recherche
Voici quelques publications de recherche intéressantes portant sur les cellules de l’épithélium pigmentaire rétinien ARPE-19.
Évaluation des réponses des microARN dans les cellules ARPE-19 face au stress oxydatif
Cet article de recherche a été publié en 2018 dans la revue *Cutaneous and Ocular Toxicology*. Cette étude a évalué l’expression des miARN en réponse au stress oxydatif induit dans des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines ARPE-19 par un traitement au peroxyde d’hydrogène.
Cette publication parue dans le *World Journal of Stem Cells* (2021) a suggéré que le milieu conditionné des cellules ARPE-19 contient des facteurs de croissance qui favorisent la différenciation neurale des cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux.
Cette étude a été publiée dans l’International Journal of Molecular Sciences (2019). Elle indique que la quercétine protège contre la libération de chimiokines stimulée par l’IL-1β dans les cellules ARPE-19 en empêchant l’activation des cascades MAPK et NF-κB, ce qui atténue la réponse inflammatoire.
Cet article de recherche a été publié dans l’International Journal of Molecular Sciences (2018). Cette étude a évalué les effets possibles du stress oxydatif et de l’inflammation sur les fonctions de la SIRT1 (sirtuine 1) et des DNMT (méthyltransférases d’ADN), ainsi que sur la méthylation de LINE-1 (élément nucléaire intercalé long-1) dans les cellules ARPE-19.
Cet article publié dans Antioxidants (2022) a révélé que les extraits de fleurs de Chrysanthemum boreale exercent des effets protecteurs contre les lésions rétiniennes induites par la N-rétinylidène-N-rétinyléthanolamine (A2E) dans les cellules ARPE-19.
Ressources sur la lignée cellulaire ARPE-19 : protocoles, vidéos et plus encore
ARPE-19 est une lignée cellulaire épithéliale rétinienne largement utilisée. Les ressources disponibles concernant les protocoles de culture et de transfection des cellules ARPE-19 sont répertoriées ici :
- Transfection de la lignée ARPE-19 : cette vidéo est un guide étape par étape permettant d’apprendre le protocole de transfection de la lignée cellulaire ARPE-19.
Voici quelques ressources décrivant le protocole de culture cellulaire de l’ARPE-19 :
- Protocole de culture cellulaire de l’ARPE-19 : Ce lien contient des renseignements sur la culture et l’entretien des cellules ARPE-19. Il comprend des informations sur le milieu de culture de l’ARPE-19, les conditions de culture, les protocoles de repiquage, ainsi que la manipulation des cultures prolifératives et cryoconservées.
Références
- Schnichels, S., et al., « Retina in a dish : Cultures cellulaires, explants rétiniens et modèles animaux pour les maladies courantes de la rétine ». Progress in retinal and eye research, 2021. 81 : p. 100880.
- Sun, H. et X. Kang, « hsa_circ_0041795 contribue à la lésion des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines (ARPE 19) induite par une glycémie élevée en piégeant le miR-646 et en activant le VEGFC ». Gene, 2020. 747 : p. 144654.
- Yang, J., et al., La désactivation de SNHG1 a inhibé la transition épithélio-mésenchymateuse et la réponse inflammatoire des cellules ARPE-19 induites par une hyperglycémie. J Inflamm Res, 2021. 14 : p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Effet protecteur des dérivés de la myricétine issus de Syzygium malaccense contre le stress induit par le peroxyde d’hydrogène dans les cellules ARPE-19. Molecular vision, 2019. 25 : p. 47.
- Kim, J., K. Cho et S.-Y. Choung, « Effet protecteur de l’extrait de Prunella vulgaris var. L contre les dommages induits par la lumière bleue dans les cellules ARPE-19 et la rétine de souris ». *Free Radical Biology and Medicine*, 2020. 152 : p. 622-631.