Celice SiHa – prispevek k raziskavam raka materničnega vratu
Celice SiHa so celice raka materničnega vratu, ki se pogosto uporabljajo v biomedicinskih raziskavah. So odlični gostitelji za transfekcijo in so zato primerne za študije genske ekspresije. Zaradi svojega človeškega izvora in pomena za raka materničnega vratu se te celice uporabljajo predvsem v raziskavah na področju biologije raka, virologije in razvoja zdravil.
- Rastno gojišče
- Za idealno rast celic SiHa se uporablja minimalni esencialni medij Eagle (EMEM), ki vsebuje 10 % FBS, 2 mM L-glutamina, 2,2 g/L NaHCO3 in uravnoteženo solno raztopino Earle (EBSS). Gojilno sredstvo se zamenja 2- do 3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve za celice SiHa je približno 17 ur.
- Vrsta rasti
- SiHa je adhezivna celična linija.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naročite SiHa
Splošne značilnosti in izvor celic SiHa
Razumevanje izvora in splošnih lastnosti celične linije je ključnega pomena, saj vpliva na njeno uporabo v vaših raziskavah. V tem delu članka boste izvedeli več o izvoru celične linije SiHa, njenih značilnih lastnostih in še veliko več: Kaj je rakava celična linija SiHa? Kaj so celice SiHa HPV? Kakšen je izvor celične linije SiHa? Kakšna je morfologija celic SiHa?
- SiHa, celična linija karcinoma materničnega vratu, je bila pridobljena iz fragmentov primarne biopsije maternice azijske ženske (stare 55 let) z rakom ploščatih celic [1].
- Celična linija SiHa ima hipertriploidni kariotip. Večina celic ima povprečno število kromosomov med 69 in 72. Vendar pa ima približno 24 % celic modalno število kromosomov 71.
- Celice SiHa so pozitivne na humani papilomavirus 16. Kažejo integracijo približno 1 do 2 kopij genoma HPV na celico [2].
- Te celice raka materničnega vratu imajo epitelijsko morfologijo.
Celična linija SiHa: Navodila za gojenje
Vzdrževanje kulture celične linije ni enostavno, dokler ne poznate vseh ključnih točk za njeno gojenje. Vedeti morate: Kakšen je čas podvojitve celic SiHa? Kaj je gojišče za celice SiHa? Kako gojiti celično linijo SiHa?
Ključne točke za gojenje celic SiHa
Čas podvojitve:
Čas podvojitve za celice SiHa je približno 17 ur.
Adherente ali v suspenziji:
SiHa je adhezivna celična linija.
Razmerje pri subkultivaciji:
Razmerje pri subkultivaciji za celice SiHa je 1:2 do 1:4. Za prenos se adhezivne celice speremo z 1x PBS. Dodamo raztopino Accutase in celice inkubiramo 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Nato se doda gojišče in celice se centrifugirajo. Pelet celic se ponovno suspendira, celice pa se prelijejo v novo kolbo za gojenje.
Rastno gojišče:
Za idealno rast celic SiHa se uporablja Eagleov minimalni esencialni medij (EMEM), ki vsebuje 10 % FBS, 2 mM L-glutamina, 2,2 g/l NaHCO₃ in Earleovo uravnoteženo solno raztopino (EBSS). Gojilno sredstvo se zamenja 2- do 3-krat na teden.
Pogoji gojenja:
Celice SiHa se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C z dovodom 5 % CO₂.
Shranjevanje:
Zamrznjene viale z linijo celic raka materničnega vratu SiHa se za daljše obdobje shranjujejo pri temperaturi pod -150 °C v električnem zamrzovalniku ali v plinski fazi tekočega dušika.
Postopek zamrzovanja in medij:
Za zamrzovanje celic SiHa se uporablja zamrzovalno sredstvo CM-1 ali CM-ACF. Celice se zamrzujejo s postopkom počasnega zamrzovanja, ki omogoča znižanje temperature le za 1 °C na minuto, da se ohrani njihova vitalnost.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice se 40 do 60 sekund hranijo v vodni kopeli pri 37 °C, dokler ne ostane le majhen kepec ledu. Nato se doda svež gojišče, celice pa se centrifugirajo, da se odstranijo sestavine sredstva za zamrzovanje. Pelet celic se ponovno suspendira, celice pa se prenesejo v kultivacijsko kolbo za rast.
Raven biološke varnosti:
Za ravnanje s celičnimi kulturami SiHa in njihovo vzdrževanje je potreben laboratorij stopnje biološke varnosti 1.
Prednosti in slabosti celične linije SiHa
Tako kot druge človeške karcinomske celične linije ima tudi SiHa nekatere posebne značilnosti, povezane z določenimi prednostmi in slabostmi. V tem besedilu smo obravnavali nekaj pomembnejših.
Prednosti celične linije SiHa za raka materničnega vratu
- Model raka materničnega vratu
- Izvira iz skvamoznega karcinoma materničnega vratu.
- Uporablja se za preučevanje mehanizmov, rasti in razvoja raka materničnega vratu.
- Izraža gene p53+ in pRB+, ki so povezani z popravljanjem DNK, regulacijo celičnega cikla in zaviranjem tumorjev.
- Tumorigeni potencial
- Celice SiHa so tumorogene in lahko pri golih miših povzročijo slabo diferencirane epidermoidne tumorje stopnje III.
- Uporabljajo se za raziskave raka in vivo ter testiranje protirakovih zdravljenj.
Pomanjkljivosti celic SiHa
- Stopnja proliferacije
- Celice SiHa se hitro razmnožujejo, kar vodi do prekomerne rasti.
- Zahtevajo pogosto pasiranje, kar poveča tveganje za genetsko nestabilnost, ki lahko sčasoma vpliva na vedenje celic.
Raziskovalne uporabe celic SiHa
Celična linija SiHa se pogosto uporablja v raziskavah raka materničnega vratu. V nadaljevanju so obravnavane nekatere specifične uporabe te celične linije.
- Študije, povezane s humanim papilomavirusom (HPV): Celice SiHa so HPV 16-pozitivne, zato so dragocen vir za preučevanje okužbe s humanim papilomavirusom, njegovih molekularnih mehanizmov ter njegove vloge pri razvoju in napredovanju raka materničnega vratu. Raziskovalci te celice uporabljajo tudi za preučevanje virusne replikacije, integracije in njenega vpliva na procese v gostiteljski celici. V študiji, izvedeni leta 2020, so s pomočjo celične linije SiHa preučevali vlogo onkoproteinov HPV E6/E7 pri razvoju raka materničnega vratu, in sicer z njihovim ciljnim zaviranjem s tehnologijo CRISPR. Rezultati so pokazali, da je zaviranje genov E6/E7 povzročilo zaviranje rasti celic SiHa in apoptozo. Zato lahko ti virusni geni služijo kot ključni cilji za razvoj terapij proti raku materničnega vratu, povezanemu s HPV [3].
- Biologija raka: Celice SiHa služijo kot neprecenljiv model za preučevanje biologije raka materničnega vratu, vključno z razvojem raka, napredovanjem, metastaziranjem in invazijo. Raziskovalci te celice uporabljajo za raziskovanje genetskih mutacij in osnovnih molekularnih poti, ki prispevajo k razvoju in rasti raka materničnega vratu; na primer, v eni od študij so z uporabo celic SiHa ugotovili, da povečana ekspresija SEC61G (gama podenota translokona SEC61) spodbuja proliferacijo celic raka materničnega vratu prek aktivacije kaskade MAPK [4].
- Presejanje in testiranje zdravil: SiHa je široko uporabljena linija rakavih celic materničnega vratu za ocenjevanje učinkovitosti potencialnih protirakavih zdravil, specifičnih za raka materničnega vratu, povezanega s HPV. Raziskovalci s pomočjo teh celic preučujejo antiproliferativni, apoptotični in antimetastatični potencial zdravil. Na primer, v študiji iz leta 2019 so preučevali citotoksični potencial izvlečkov plodov Vatica diospyroides Symington Type SS na celični liniji raka materničnega vratu SiHa [5].
SiHa-celice za vaše raziskave!
Raziskovalne publikacije, v katerih so predstavljene celice SiHa
Nekatere pomembne in pogosto citirane raziskovalne publikacije obravnavajo celično linijo SiHa za skvamozni karcinom materničnega vratu.
Ta publikacija v reviji OncoTargets and Therapy (2019) je predlagala, da naravna spojina aloe-emodin v celicah raka materničnega vratu SiHa izvaja apoptične učinke, povezane s HPV E6/E7 in presnovo glukoze.
Ta članek je bil objavljen v reviji »Future Journal of Pharmaceutical Sciences« leta 2022. Ta študija je preučevala protitumorske aktivnosti izvlečka listov rastline Excoecaria agallocha (L.) na celični liniji raka materničnega vratu SiHa.
Ta študija, objavljena v reviji »Journal of Sol-Gel Science and Technology« (2022), je pokazala, da molekula 1,10-fenantrolina ob vezavi z nanodelci cinkovega sulfata izvaja pomembne antiproliferativne učinke v celicah SiHa.
Ta raziskava je bila objavljena v reviji »Oncology Reports« leta 2019. Študija je pokazala, da astragalozid IV, naravni produkt, zavira migracijo in invazijo celic SiHa z moduliranjem signalnih poti PI3K in MAPK, ki jih posreduje TGF-β1.
Ta študija, objavljena v reviji »Biomedicine & Pharmacotherapy« (2020), je pokazala, da IFI16 (interferon-gama inducibilni protein 16) regulira gen PD-L1 prek aktivacije poti STING-TBK1-NF-kB, s čimer spodbuja rast rakavih celic materničnega vratu SiHa.
Viri za celično linijo SiHa: protokoli, videoposnetki in še več
Tukaj je nekaj spletnih virov, posvečenih celicam SiHa.
- Transfekcija celic SiHa: Ta raziskovalni članek vsebuje protokol za vzdrževanje celic raka materničnega vratu SiHa in za transfekcijo celic SiHa.
Naslednja povezava vsebuje informacije o celični kulturi za celice SiHa.
- Celična linija SiHa: Ta spletna stran vsebuje veliko dragocenih podatkov o celični liniji SiHa. To vključuje informacije o gojiščih, pogojih gojenja, protokolih za subkultiviranje celic SiHa ter ravnanju z njihovimi proliferativnimi in krioprezerviranimi kulturami.
Pogosta vprašanja o celicah raka materničnega vratu SiHa
Viri
- Melzer, C., J. von der Ohe in R. Hass, Kratek pregled: medsebojno vplivanje mezenhimalnega stroma/celic, podobnih matičnim celicam, z rakavimi celicami ponuja terapevtski potencial. Stem cells, 2018. 36(7): str. 951–968.
- Ostrowska, K.M. in sod., Preučevanje vpliva visokorizičnega humane papilomavirusa na biokemično sestavo celic raka materničnega vratu z uporabo vibracijske spektroskopije. Analyst, 2010. 135(12): str. 3087–3093.
- Chen, Y., in sod., Zaviranje rasti celic raka materničnega vratu in vitro in in vivo prek cepitve mRNA-jev E6/E7 človeškega papilomavirusa s sistemom CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: str. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G spodbuja proliferacijo raka materničnega vratu z aktiviranjem signalne poti MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Protirakavni potencial sadnih izvlečkov iz Vatica diospyroides simington tipa SS in njihov učinek na programirano celično smrt celičnih linij raka materničnega vratu. The Scientific World Journal, 2019. 2019.