Celule U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

800,00 EUR*

Produsele sunt expediate congelate în gheață carbonică în criotuburi. Fiecare criotub conține de obicei 3 × 10 ⁶ celule pentru linii aderente sau 5 × 10⁶ celule pentru linii în suspensie (consultați certificatul de analiză al lotului pentru detalii).

Prețuri fără taxe plus costuri de expediere

cryovial

Numărul produsului: 300664

Fișă cu date de securitate

Fișa produsului

Acordul cu terții

Descriere	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 este o linie celulară de osteosarcom uman editată genetic, derivată din celule U2OS, în care gena endogenă SEH1L (SEH1) a fost modificată folosind tehnologia CRISPR/Cas9 pentru a codifica o etichetă SNAPf în cadru. SEH1 este o componentă a complexului Y (cunoscut și sub numele de complexul NUP107-160), un modul structural central al complexului porilor nucleari (NPC) care contribuie la asamblarea și stabilitatea scheletului porilor. Prin inserarea secvenței de codificare SNAPf la locusul endogen, proteina SEH1 marcată este exprimată sub controlul regulator nativ, păstrând nivelurile de expresie fiziologică și minimizând perturbările compoziției porilor nucleari. Eticheta SNAPf este o variantă modificată genetic, cu reacție rapidă, a etichetei SNAP, care se leagă covalent de substraturi conjugate cu benzilguanină, permițând marcarea fluorescentă selectivă și stabilă în celule vii sau fixate. În celulele U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, proteina de fuziune se localizează în învelișul nuclear într-un model punctiform caracteristic distribuției NPC. Deoarece marcarea are loc la nivelurile proteice endogene, acest sistem este foarte potrivit pentru microscopia fluorescentă cantitativă, imagistica de super-rezoluție și analizele de urmărire a particulelor individuale care vizează disecarea organizării și stoichiometriei NPC. Morfologia plată și nucleele mari ale celulelor U2OS facilitează și mai mult vizualizarea de înaltă rezoluție a structurilor învelișului nuclear. SEH1 participă la biogeneza NPC și a fost implicat și în procesele asociate kinetocorului în timpul mitozei. În consecință, această linie celulară oferă o platformă robustă pentru investigarea asamblării și dezasamblării NPC dependente de ciclul celular, a organizării spațiale a complexului Y în cadrul scheletului porilor și a potențialelor roluri duale ale SEH1 la nivelul învelișului nuclear și al kinetocorilor mitotici. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 permite studiile mecaniciste ale arhitecturii și dinamicii porilor nucleari în condiții de expresie relevante din punct de vedere fiziologic.
Organism	Om
Țesut	Os
Boala	Osteosarcom

Vârsta	15 ani
Gen	Femei
Etnicitate	Caucazian
Morfologie	De tip epitelial
Proprietăți de creștere	Aderent

Mențiune	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (număr de catalog Cytion 300664)
Nivelul de biosecuritate	1
NCBI_TaxID	9606
Deponent	Laboratorul Ellenberg (EMBL)
Statutul OMG	OMG-S1: Această linie celulară de osteosarcom uman (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) conține o fuziune SNAPf-SEH1 mediată de CRISPR care permite marcarea selectivă a nucleoporinei SEH1. Modificarea este prezentă în mod stabil. Această clasificare se aplică numai în Germania și poate diferi în alte țări.

Expresia proteinelor	SEH1, SNAPf-tag

Mediu de cultură	McCoys 5a, cu: 3,0 g/L glucoză, cu: glutamină stabilă, cu: 2,0 mM piruvat de sodiu, cu: 2,2 g/L NaHCO3 (numărul articolului Cytion 820200a)
Suplimente	Suplimentați mediul cu 10% FBS, 3,0 g/L glucoză, glutamină stabilă, 2,0 mM piruvat de sodiu, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Reactiv de disociere	Accutase
Subcultură	Îndepărtați mediul vechi de pe celulele aderente și spălați-le cu PBS care nu conține calciu și magneziu. Pentru flacoanele T25, se utilizează 3-5 ml de PBS, iar pentru flacoanele T75, 5-10 ml. Apoi, se acoperă celulele complet cu Accutase, folosind 1-2 ml pentru flacoanele T25 și 2,5 ml pentru flacoanele T75. Lăsați celulele la incubare la temperatura camerei timp de 8-10 minute pentru a le detașa. După incubare, amestecați ușor celulele cu 10 ml de mediu pentru a le resuspenda, apoi centrifugați la 300xg timp de 3 minute. Aruncați supernatantul, resuspendați celulele în mediu proaspăt și transferați-le în flacoane noi care conțin deja mediu proaspăt.
Înghețați mediul	Ca mediu de crioconservare, folosim mediu de creștere complet (inclusiv FBS) + 10% DMSO pentru o viabilitate adecvată după dezghețare sau CM-1 (număr de catalog Cytion 800100), care include osmoprotectanți optimizați și stabilizatori metabolici pentru a spori recuperarea și a reduce stresul indus de criogenie.
Decongelarea și cultivarea celulelor	Confirmați că flaconul rămâne profund înghețat la livrare, deoarece celulele sunt expediate pe gheață carbonică pentru a menține temperaturi optime în timpul transportului. La primire, fie depozitați crioviola imediat la temperaturi sub -150 °C pentru a asigura păstrarea integrității celulare, fie treceți la etapa 3 dacă este necesară cultivarea imediată. Pentru cultivarea imediată, dezghețați rapid flaconul prin scufundarea acestuia într-o baie de apă la 37 °C cu apă curată și un agent antimicrobian, agitându-l ușor timp de 40-60 de secunde până când rămâne o mică aglomerare de gheață. Se efectuează toate etapele ulterioare în condiții sterile, într-o hotă cu flux, dezinfectând crioviola cu etanol 70% înainte de deschidere. Se deschide cu grijă flaconul dezinfectat și se transferă suspensia celulară într-un tub de centrifugare de 15 ml care conține 8 ml de mediu de cultură la temperatura camerei, amestecând ușor. Se centrifughează amestecul la 300 x g timp de 3 minute pentru a separa celulele și se aruncă cu grijă supernatantul care conține mediul de congelare rezidual. Se resuspendă ușor peletul celular în 10 ml de mediu de cultură proaspăt. Pentru celulele aderente, împărțiți suspensia între două flacoane de cultură T25; pentru culturile în suspensie, transferați tot mediul într-un flacon T25 pentru a promova interacțiunea și creșterea celulară eficientă. Respectați protocoalele de subcultură stabilite pentru creșterea și menținerea continuă a liniei celulare, asigurând rezultate experimentale fiabile.
Atmosfera de incubație	37°C, 5%_CO2, atmosferă umidificată.
Acoperirea flaconului	Pentru atașare optimă și viabilitate după decongelare, vă recomandăm să utilizați flacoane sau plăci acoperite cu colagen.
Procedura de congelare	Liniile celulare crioconservate sunt expediate pe gheață carbonică în ambalaje izolate, validate, cu suficient agent frigorific pentru a menține aproximativ -78 °C pe toată durata transportului. La primire, se inspectează imediat recipientul și se transferă fără întârziere fiolele în depozitul corespunzător.
Condiții de expediere	Liniile celulare crioconservate sunt expediate pe gheață carbonică în ambalaje izolate, validate, cu suficient agent frigorific pentru a menține aproximativ -78 °C pe toată durata transportului. La primire, se inspectează imediat recipientul și se transferă fără întârziere fiolele în depozitul corespunzător.
Condiții de depozitare	Pentru conservarea pe termen lung, flacoanele se plasează în azot lichid în fază de vapori la o temperatură cuprinsă între -150 și -196 °C. Păstrarea la -80 °C este acceptabilă doar ca o scurtă etapă intermediară înainte de transferul în azot lichid.

Sterilitate	Contaminarea cu micoplasmă este exclusă utilizând atât teste bazate pe PCR, cât și metode de detectare a micoplasmei bazate pe luminescență. Pentru a se asigura că nu există contaminare bacteriană, fungică sau de drojdie, culturile celulare sunt supuse unor inspecții vizuale zilnice.

Vă rugăm să rețineți că această linie celulară nu este disponibilă în cadrul unui MTA Cytion standard, deoarece necesită un acord cu o terță parte și/sau face obiectul negocierii cu licențiatorul original.

Celule U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

Informații generale

Caracteristici

Date de reglementare

Date biomoleculare

Manipulare

Controlul calității / Profil genetic / HLA

Acordul cu terții