Células SiHa – A lançar luz sobre a investigação do cancro do colo do útero
As células SiHa são células de cancro do colo do útero amplamente utilizadas na investigação biomédica. São excelentes hospedeiras para transfecção e, como tal, adequadas para estudos de expressão génica. Devido à sua origem humana e à sua relevância no contexto do cancro do colo do útero, estas células são utilizadas principalmente em estudos de biologia do cancro, virologia e desenvolvimento de medicamentos.
- Meio de crescimento
- Para o crescimento ideal das células SiHa, utiliza-se o meio mínimo essencial de Eagle (EMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (FBS), 2 mM de L-glutamina, 2,2 g/L de NaHCO₃ e a solução salina equilibrada de Earle (EBSS). O meio é substituído 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células SiHa é de aproximadamente 17 horas.
- Tipo de crescimento
- A SiHa é uma linha celular aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomendar SiHa
Características gerais e origem das células SiHa
Compreender a origem e as características gerais de uma linha celular é crucial, uma vez que influencia a sua utilização na sua investigação. Nesta secção do artigo, irá conhecer a origem da linha celular SiHa, as suas características distintivas e muito mais: O que é a linha celular cancerígena SiHa? O que são as células SiHa HPV? Qual é a origem da linha celular SiHa? Qual é a morfologia da SiHa?
- A SiHa, a linha celular de carcinoma cervical, foi derivada de fragmentos de uma biópsia uterina primária de uma mulher asiática (55 anos) com cancro de células escamosas [1].
- A linha celular SiHa apresenta um cariótipo hipertriploide. A maioria das células tem um número médio de cromossomas entre 69 e 72. No entanto, cerca de 24% das células possuem um número modal de cromossomas de 71.
- As células SiHa são positivas para o vírus do papiloma humano tipo 16. Apresentam integração de cerca de 1 a 2 cópias do genoma do HPV por célula [2].
- Estas células de cancro do colo do útero apresentam uma morfologia epitelial.
Linha celular SiHa: Informações sobre a cultura
Manter uma cultura de uma linha celular não é fácil até se conhecerem todos os pontos-chave para a sua cultura. Deve saber: Qual é o tempo de duplicação das células SiHa? Qual é o meio de cultura das células SiHa? Como se cultiva a linha celular SiHa?
Pontos-chave para a cultura de células SiHa
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células SiHa é de aproximadamente 17 horas.
Adesivas ou em suspensão:
A SiHa é uma linha celular aderente.
Rácio de subcultivo:
A proporção de subcultivo para as células SiHa é de 1:2 a 1:4. Para a passagem, as células aderentes são lavadas com PBS 1x. Adiciona-se uma solução de Accutase e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, adiciona-se o meio de cultura e as células são centrifugadas. O sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco para cultura.
Meio de crescimento:
Para o crescimento ideal das células SiHa, utiliza-se o meio mínimo essencial de Eagle (EMEM) contendo 10% de FBS, 2 mM de L-glutamina, 2,2 g/L de NaHCO₃ e a Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS). O meio é substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As células SiHa são mantidas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
Os frascos congelados da linha celular SiHa de cancro do colo do útero são armazenados a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico ou na fase de vapor de azoto líquido para um período mais prolongado.
Processo de congelação e meio:
Utiliza-se o meio de congelação CM-1 ou CM-ACF para a congelação das células SiHa. As células são congeladas através de um método de congelação lenta que permite apenas uma diminuição de 1 °C por minuto, de modo a proteger a viabilidade das células.
Processo de descongelação:
As células congeladas são mantidas durante 40 a 60 segundos num banho-maria a 37 °C até restar apenas um pequeno aglomerado de gelo. Posteriormente, é adicionado meio de crescimento fresco e as células são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. O sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um frasco de cultura para crescimento.
Nível de biossegurança:
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear e manter culturas celulares de SiHa.
Vantagens e desvantagens da linha celular SiHa
Tal como outras linhas celulares de carcinoma humano, a SiHa também possui algumas características distintas associadas a certas vantagens e desvantagens. Aqui, abordámos algumas das mais significativas.
Vantagens da linha celular SiHa do cancro do colo do útero
- Modelo de cancro do colo do útero
- Derivada do carcinoma espinocelular do colo do útero.
- Utilizada para estudar os mecanismos, o crescimento e o desenvolvimento do cancro do colo do útero.
- Expressa os genes p53+ e pRB+, que estão relacionados com a reparação do ADN, a regulação do ciclo celular e a supressão tumoral.
- Potencial tumorigénico
- As células SiHa são tumorigénicas e podem induzir tumores epidermoides de grau III, pouco diferenciados, em ratos nude.
- Utilizadas para investigação do cancro in vivo e para testar tratamentos anticancerígenos.
Desvantagens das células SiHa
- Taxa de proliferação
- As células SiHa proliferam rapidamente, o que leva a um crescimento excessivo.
- Exigem passagens frequentes, o que aumenta o risco de instabilidade genética, o que pode afetar o comportamento celular ao longo do tempo.
Aplicações de investigação das células SiHa
A linha celular SiHa é amplamente utilizada na investigação do cancro do colo do útero. São aqui discutidas algumas aplicações específicas desta linha celular.
- Estudos relacionados com o papilomavírus humano (HPV): As células SiHa são positivas para o HPV 16, pelo que constituem recursos valiosos para o estudo da infeção pelo papilomavírus humano, dos seus mecanismos moleculares e do seu papel no desenvolvimento e progressão do cancro do colo do útero. Os investigadores também utilizam estas células para investigar a replicação viral, a integração e o seu impacto nos processos das células hospedeiras. Um estudo realizado em 2020 utilizou a linha celular SiHa para examinar o papel das oncoproteínas E6/E7 do HPV no desenvolvimento do cancro do colo do útero, atuando sobre elas com a tecnologia CRISPR. Os resultados revelaram que a supressão dos genes E6/E7 provocou a inibição do crescimento das células SiHa e a apoptose. Por conseguinte, estes genes virais podem servir como alvos farmacológicos cruciais para o desenvolvimento de terapias contra o cancro do colo do útero associado ao HPV [3].
- Biologia do cancro: as células SiHa constituem um modelo inestimável para o estudo da biologia do cancro do colo do útero, incluindo o desenvolvimento, a progressão, a metástase e a invasão do cancro. Os investigadores utilizam estas células para explorar as mutações genéticas e as vias moleculares subjacentes que contribuem para o desenvolvimento e crescimento do cancro do colo do útero; por exemplo, um estudo utilizou células SiHa e descobriu que a regulação positiva da SEC61G (subunidade gama do translocão SEC61) estimula a proliferação das células cancerígenas do colo do útero através da ativação da cascata MAPK [4].
- Triagem e testes de fármacos: A SiHa é uma linha celular de cancro do colo do útero amplamente utilizada para avaliar a eficácia de potenciais fármacos anticancerígenos específicos para o cancro do colo do útero associado ao HPV. Os investigadores exploram o potencial antiproliferativo, apoptótico e antimetastático dos fármacos utilizando estas células. Por exemplo, um estudo realizado em 2019 investigou o potencial citotóxico de extratos do fruto de Vatica diospyroides Symington Tipo SS na linha celular de cancro do colo do útero SiHa [5].
Células SiHa para a sua investigação!
Publicações científicas que apresentam as células SiHa
Algumas publicações de investigação significativas e frequentemente citadas abordam a linha celular SiHa de carcinoma escamoso do colo do útero.
Esta publicação na revista *OncoTargets and Therapy* (2019) propôs que um composto natural, a aloe-emodina, exerce efeitos apoptóticos associados ao HPV E6/E7 e ao metabolismo da glicose nas células de cancro do colo do útero SiHa.
Este artigo foi publicado na revista *Future Journal of Pharmaceutical Sciences* em 2022. Este estudo investigou as atividades antitumorais do extrato de folhas da planta *Excoecaria agallocha (L.)* na linha celular de cancro do colo do útero SiHa.
Este estudo, publicado no Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), propôs que a molécula de 1,10-fenantrolina, ao acoplar-se a nanopartículas de sulfato de zinco, exerce efeitos antiproliferativos significativos nas células SiHa.
Esta investigação foi publicada na revista Oncology Reports em 2019. O estudo revelou que a astragalosídeo IV, um produto natural, suprime a migração e a invasão das células SiHa através da modulação das vias de sinalização PI3K e MAPK mediadas pelo TGF-β1.
Este estudo publicado na revista *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) revelou que a IFI16 (proteína 16 induzível pelo interferão-gama) regula o gene PD-L1 através da ativação da via STING-TBK1-NF-kB, para estimular o crescimento das células SiHa do cancro do colo do útero.
Recursos para a linha celular SiHa: protocolos, vídeos e muito mais
Aqui estão alguns recursos online sobre as células SiHa.
- Transfecção das células SiHa: Este artigo de investigação contém um protocolo para a manutenção das células SiHa de cancro do colo do útero e para a transfecção dessas células.
A ligação seguinte contém informações sobre a cultura celular das células SiHa.
- Linha celular SiHa: Este site contém muitos dados valiosos sobre a linha celular SiHa. Inclui informações sobre meios de crescimento, condições de cultura, protocolos para subcultura das células SiHa e manuseamento das suas culturas proliferativas e criopreservadas.
Perguntas frequentes sobre as células de carcinoma cervical SiHa
Referências
- Melzer, C., J. von der Ohe e R. Hass, «Revisão concisa: a interação entre o estroma mesenquimal/células semelhantes a células estaminais e as células cancerígenas oferece potencial terapêutico». Stem cells, 2018. 36(7): p. 951-968.
- Ostrowska, K.M., et al., Investigação da influência do papilomavírus humano de alto risco na composição bioquímica das células cancerígenas do colo do útero utilizando espectroscopia vibracional. Analyst, 2010. 135(12): p. 3087-3093.
- Chen, Y., et al., Inibição do crescimento in vitro e in vivo de células de cancro do colo do útero humano através da clivagem dos mRNAs E6/E7 do papilomavírus humano pelo sistema CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: p. 104794.
- Fan, Y., et al., A SEC61G promove a proliferação do cancro do colo do útero através da ativação da via de sinalização MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Potencial anticancerígeno dos extratos de frutos de Vatica diospyroides do tipo Symington SS e o seu efeito na morte celular programada de linhas celulares de cancro do colo do útero. The Scientific World Journal, 2019. 2019.