Células KC
Informações gerais
| Descrição | A KC (Kc167) é uma linha celular embrionária de Drosophila melanogaster derivada de um embrião feminino na fase de fecho dorsal, registada no Cellosaurus com a referência CVCL_Z833. A linha foi originalmente estabelecida e tem sido amplamente utilizada na biologia celular da Drosophila, em crivagens genéticas e na genómica funcional. As células Kc167 foram imortalizadas com SV40 e crescem de forma semi-aderente, formando uma população mista de células aderentes e flutuantes. Estão entre as linhas celulares de Drosophila mais bem caracterizadas e são totalmente suscetíveis ao silenciamento génico mediado por RNAi, o que as torna um modelo fundamental para triagens de RNAi ao nível do genoma na biologia dos invertebrados. As células KC são aplicáveis na biologia celular da Drosophila, em triagens de RNAi e CRISPR ao nível do genoma, em estudos de vias de transdução de sinal (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), na investigação da imunidade inata e em estudos comparativos de vias conservadas evolutivamente. O genoma da Drosophila, totalmente sequenciado e anotado, combinado com extensas bases de dados públicas de reagentes de RNAi (por exemplo, DRSC/TRiP), torna as células KC particularmente poderosas para a descoberta genómica funcional imparcial. Aplica-se a classificação BSL-2 devido à imortalização por SV40. As células KC são cultivadas em meio Schneider para Drosophila, suplementado com 2 mM de glutamina e 10% de FBS. É importante referir que as linhas celulares de Drosophila são cultivadas a 25 °C em ar ambiente sem CO₂ (e não a 37 °C / 5% de CO₂, como acontece com as células de mamíferos). As células são repicadas por ressuspensão e diluição suaves (crescimento semiaderente). O meio é renovado ou as células são diluídas a cada 2–3 dias. |
|---|---|
| Organismo | Drosophila melanogaster (mosca-da-fruta) |
| Tecido | Embrião |
| Doença | Normal |
| Sítio metastático | Embrião (fase de fecho dorsal) |
| Aplicações | Biologia celular da Drosophila; crivagens de RNAi ao nível do genoma; crivagens CRISPR; transdução de sinais (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); imunidade inata; genómica funcional de invertebrados |
| Sinónimos | KC, K C |
Caraterísticas
| Idade | Fase de fechamento dorsal |
|---|---|
| Género | Feminino |
| Morfologia | De tipo epitelial semi-aderente |
| Tipo de célula | Células embrionárias |
| Propriedades de crescimento | semi-aderente |
Dados regulamentares
| Citação | KC (número de catálogo Cytion 300604) |
|---|---|
| Nível de biossegurança | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAcessão | CVCL_Z833 |
| Estatuto dos OGM | GMO-S2: Esta linha celular de Drosophila contém uma cassete de imortalização SV40 integrada de forma estável. É necessária uma contenção de nível BSL-2. Esta classificação aplica-se apenas na Alemanha e pode diferir noutros países. |
Dados biomoleculares
| Suscetibilidade ao vírus | SV40 imortalizado |
|---|
Manuseamento
| Meio de cultura | Meio de Schneider para Drosophila + 2 mM de glutamina + 10 % de soro fetal bovino (FBS). |
|---|---|
| Suplementos | Adicione ao meio 2 mM de glutamina e 10% de FBS |
| Reagente de dissociação | Não é necessário (semi-aderente; ressuspender cuidadosamente) |
| Tempo de duplicação | aproximadamente 24 a 48 horas |
| Subcultura | Pipete cuidadosamente a cultura para ressuspender as células semi-aderentes. Transfira um volume adequado para um novo frasco e adicione meio de Schneider fresco e pré-aquecido. Dilua até uma densidade de 5 × 10⁵ a 1 × 10⁶ células/ml. Incube a 25 °C em ar ambiente, sem CO₂. |
| Rácio de divisão | 1 a 3 |
| Densidade de sementeira | 5 × 10⁵ a 1 × 10⁶ células/ml |
| Renovação de fluidos | A cada 2 ou 3 dias |
| Congelar o meio | Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio. |
| Descongelamento e cultura de células |
|
| Atmosfera de incubação | 25 °C, ar ambiente (não é necessário CO₂). |
| Condições de envio | As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado. |
| Condições de armazenamento | Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido. |
Controlo de Qualidade e Análise Molecular
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