Komórki SiHa – nowe spojrzenie na badania nad rakiem szyjki macicy
Komórki SiHa to komórki raka szyjki macicy szeroko stosowane w badaniach biomedycznych. Stanowią one doskonałe komórki-gospodarze do transfekcji, dzięki czemu nadają się do badań nad ekspresją genów. Ze względu na swoje ludzkie pochodzenie i związek z rakiem szyjki macicy komórki te są wykorzystywane głównie w badaniach z zakresu biologii nowotworów, wirusologii oraz opracowywania leków.
- Pożywka hodowlana
- Do optymalnego wzrostu komórek SiHa stosuje się minimalną pożywkę podstawową Eagle'a (EMEM) zawierającą 10% surowicy płodowej bydlęcej (FBS), 2 mM L-glutaminy, 2,2 g/l NaHCO3 oraz zrównoważony roztwór soli Earle'a (EBSS). Pożywkę wymienia się 2–3 razy w tygodniu.
- Czas podwojenia
- Czas podwojenia komórek SiHa wynosi około 17 godzin.
- Typ wzrostu
- SiHa to linia komórek adhezyjnych.
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-1
- Dostępne w
- Cytion — Zamów SiHa
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek SiHa
Zrozumienie pochodzenia linii komórkowej i jej ogólnych cech ma kluczowe znaczenie, ponieważ wpływa na jej wykorzystanie w badaniach naukowych. W tej sekcji artykułu dowiesz się o pochodzeniu linii komórkowej SiHa, jej charakterystycznych cechach i wielu innych kwestiach: Czym jest linia komórkowa nowotworowa SiHa? Czym są komórki SiHa HPV? Jakie jest pochodzenie linii komórkowej SiHa? Jaka jest morfologia komórek SiHa?
- SiHa, linia komórkowa raka szyjki macicy, została wyhodowana z fragmentów pierwotnej biopsji macicy azjatyckiej kobiety (55 lat) z rakiem płaskonabłonkowym [1].
- Linia komórkowa SiHa wykazuje kariotyp hipertriploidalny. Większość komórek ma średnią liczbę chromosomów wynoszącą od 69 do 72. Jednak około 24% komórek charakteryzuje się modalną liczbą chromosomów wynoszącą 71.
- Komórki SiHa są dodatnie pod względem wirusa brodawczaka ludzkiego typu 16. Wykazują one integrację około 1–2 kopii genomu HPV na komórkę [2].
- Komórki raka szyjki macicy wykazują morfologię nabłonkową.
Linia komórkowa SiHa: Informacje dotyczące hodowli
Utrzymanie hodowli linii komórkowej nie jest łatwe, dopóki nie poznasz wszystkich kluczowych aspektów związanych z jej hodowlą. Powinieneś wiedzieć: Jaki jest czas podwojenia komórek SiHa? Jakie są pożywki do hodowli komórek SiHa? Jak hoduje się linię komórkową SiHa?
Kluczowe kwestie dotyczące hodowli komórek SiHa
Czas podwojenia:
Czas podwojenia komórek SiHa wynosi około 17 godzin.
Komórki przylegające czy w zawiesinie:
SiHa to linia komórkowa adhezyjna.
Współczynnik subkultury:
Współczynnik subkultury dla komórek SiHa wynosi od 1:2 do 1:4. W celu pasażowania komórki adhezyjne płucze się 1x PBS. Dodaje się roztwór Accutase, a komórki inkubuje się przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Następnie dodaje się pożywkę hodowlaną, a komórki odwirowuje się. Osad komórkowy zawiesza się ponownie, a komórki przelewa się do nowej kolby w celu dalszej hodowli.
Pożywka wzrostowa:
Do optymalnego wzrostu komórek SiHa stosuje się minimalną pożywkę podstawową Eagle'a (EMEM) zawierającą 10% FBS, 2 mM L-glutaminy, 2,2 g/l NaHCO₃ oraz zrównoważony roztwór soli Earle'a (EBSS). Pożywkę wymienia się 2–3 razy w tygodniu.
Warunki hodowli:
Komórki SiHa są hodowane w nawilżanym inkubatorze o temperaturze 37°C z dopływem 5% CO₂.
Przechowywanie:
Zamrożone fiolki z linią komórkową raka szyjki macicy SiHa przechowuje się w temperaturze poniżej -150°C w zamrażarce elektrycznej lub, w przypadku dłuższego przechowywania, w fazie gazowej ciekłego azotu.
Proces zamrażania i pożywka:
Do zamrażania komórek SiHa stosuje się pożywkę zamrażającą CM-1 lub CM-ACF. Komórki zamraża się metodą powolnego zamrażania, która pozwala na spadek temperatury o zaledwie 1 °C na minutę, co ma na celu ochronę żywotności komórek.
Proces rozmrażania:
Zamrożone komórki trzyma się przez 40 do 60 sekund w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, aż pozostanie niewielka grudka lodu. Następnie dodaje się świeże podłoże hodowlane, a komórki odwirowuje się w celu usunięcia składników podłoża do zamrażania. Osad komórkowy ponownie zawiesza się, a komórki umieszcza się w kolbie hodowlanej w celu dalszego wzrostu.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Do obsługi i utrzymywania hodowli komórek SiHa wymagane jest laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.
Zalety i wady linii komórkowej SiHa
Podobnie jak inne ludzkie linie komórkowe nowotworowe, linia SiHa również posiada pewne charakterystyczne cechy związane z określonymi zaletami i wadami. W niniejszym artykule omówiliśmy kilka istotnych z nich.
Zalety linii komórkowej SiHa raka szyjki macicy
- Model raka szyjki macicy
- Pochodzi z raka płaskonabłonkowego szyjki macicy.
- Wykorzystywana do badania mechanizmów, wzrostu i rozwoju raka szyjki macicy.
- Ekspresja genów p53+ i pRB+, które są związane z naprawą DNA, regulacją cyklu komórkowego i supresją nowotworową.
- Potencjał nowotworowy
- Komórki SiHa mają właściwości nowotworotwórcze i mogą wywoływać słabo zróżnicowane nowotwory nabłonkowe III stopnia u myszy nagich.
- Wykorzystywane w badaniach nad rakiem in vivo oraz do testowania terapii przeciwnowotworowych.
Wady komórek SiHa
- Tempo proliferacji
- Komórki SiHa szybko się namnażają, co prowadzi do nadmiernego rozrostu.
- Wymagają częstego pasażowania, co zwiększa ryzyko niestabilności genetycznej, która z czasem może wpływać na zachowanie komórek.
Zastosowania badawcze linii komórkowej SiHa
Linia komórkowa SiHa jest szeroko wykorzystywana w badaniach nad rakiem szyjki macicy. Poniżej omówiono kilka konkretnych zastosowań tej linii komórkowej.
- Badania związane z wirusem brodawczaka ludzkiego (HPV): Komórki SiHa są HPV 16-dodatnie, dlatego stanowią cenny materiał do badania zakażenia wirusem brodawczaka ludzkiego, jego mechanizmów molekularnych oraz roli w rozwoju i progresji raka szyjki macicy. Naukowcy wykorzystują te komórki również do badania replikacji wirusa, jego integracji oraz wpływu na procesy zachodzące w komórkach gospodarza. W badaniu przeprowadzonym w 2020 r. wykorzystano linię komórkową SiHa do zbadania roli onkoprotein E6/E7 wirusa HPV w rozwoju raka szyjki macicy poprzez ich wyciszenie za pomocą technologii CRISPR. Wyniki wykazały, że wyciszenie genów E6/E7 spowodowało zahamowanie wzrostu komórek SiHa i apoptozę. W związku z tym geny wirusowe mogą stanowić kluczowe cele terapeutyczne w opracowywaniu terapii przeciwko rakowi szyjki macicy związanemu z HPV [3].
- Biologia nowotworów: Komórki SiHa stanowią nieoceniony model do badania biologii raka szyjki macicy, w tym rozwoju nowotworu, jego progresji, przerzutów i inwazji. Naukowcy wykorzystują te komórki do badania mutacji genetycznych i leżących u ich podstaw szlaków molekularnych przyczyniających się do rozwoju i wzrostu raka szyjki macicy; na przykład w jednym z badań wykorzystano komórki SiHa i stwierdzono, że nadekspresja SEC61G (podjednostka gamma translokonu SEC61) sprzyja proliferacji komórek raka szyjki macicy poprzez aktywację kaskady MAPK [4].
- Przesiewanie i testowanie leków: SiHa to powszechnie stosowana linia komórkowa raka szyjki macicy służąca do oceny skuteczności potencjalnych leków przeciwnowotworowych skierowanych przeciwko rakowi szyjki macicy związanemu z HPV. Naukowcy badają potencjał leków w zakresie hamowania proliferacji, indukowania apoptozy oraz zapobiegania przerzutom przy użyciu tych komórek. Przykładem jest badanie przeprowadzone w 2019 r., w którym analizowano potencjał cytotoksyczny ekstraktów z owoców Vatica diospyroides Symington typu SS na linii komórkowej raka szyjki macicy SiHa [5].
Komórki SiHa do Twoich badań!
Publikacje naukowe dotyczące linii komórkowej SiHa
Niektóre istotne i często cytowane publikacje naukowe dotyczą linii komórkowej SiHa, reprezentującej płaskonabłonkowego raka szyjki macicy.
W publikacji w czasopiśmie „OncoTargets and Therapy” (2019) wysunięto hipotezę, że naturalny związek, aloes-emodyna, wywiera działanie apoptyczne związane z białkami E6/E7 wirusa HPV oraz metabolizmem glukozy w komórkach raka szyjki macicy SiHa.
Artykuł ten ukazał się w czasopiśmie „Future Journal of Pharmaceutical Sciences” w 2022 roku. W badaniu tym analizowano działanie przeciwnowotworowe wyciągu z liści rośliny Excoecaria agallocha (L.) na linię komórkową raka szyjki macicy SiHa.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Journal of Sol-Gel Science and Technology” (2022) wysunięto hipotezę, że cząsteczka 1,10-fenantroliny po sprzężeniu z nanocząstkami siarczanu cynku wywiera znaczące działanie antyproliferacyjne na komórki SiHa.
Badania te zostały opublikowane w czasopiśmie „Oncology Reports” w 2019 roku. Badanie wykazało, że astragalozyd IV, produkt naturalny, hamuje migrację i inwazję komórek SiHa poprzez modulowanie szlaków sygnałowych PI3K i MAPK, w których pośredniczy TGF-β1.
Badanie opublikowane w czasopiśmie „Biomedicine & Pharmacotherapy” (2020) wykazało, że białko IFI16 (białko indukowane przez interferon gamma nr 16) reguluje gen PD-L1 poprzez aktywację szlaku STING-TBK1-NF-kB, sprzyjając w ten sposób wzrostowi komórek raka szyjki macicy SiHa.
Materiały dotyczące linii komórkowej SiHa: protokoły, filmy i nie tylko
Oto kilka zasobów internetowych dotyczących komórek SiHa.
- Transfekcja komórek SiHa: Ten artykuł naukowy zawiera protokół dotyczący hodowli komórek raka szyjki macicy SiHa oraz ich transfekcji.
Poniższy link zawiera informacje dotyczące hodowli komórek SiHa.
- Linia komórkowa SiHa: Ta strona internetowa zawiera wiele cennych danych dotyczących linii komórkowej SiHa. Obejmują one informacje na temat pożywek wzrostowych, warunków hodowli, protokołów subkulturowania komórek SiHa oraz postępowania z ich hodowlami proliferacyjnymi i kriokonserwowanymi.
Najczęściej zadawane pytania dotyczące komórek raka szyjki macicy SiHa
Bibliografia
- Melzer, C., J. von der Ohe i R. Hass, Zwięzły przegląd: interakcje między komórkami zrębu mezenchymalnego/komórkami o charakterze podobnym do komórek macierzystych a komórkami nowotworowymi stwarzają potencjał terapeutyczny. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. i in., Badanie wpływu wirusa brodawczaka ludzkiego wysokiego ryzyka na skład biochemiczny komórek raka szyjki macicy z wykorzystaniem spektroskopii wibracyjnej. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y. i in., Hamowanie wzrostu komórek raka szyjki macicy u ludzi in vitro i in vivo poprzez rozszczepianie mRNA białek E6/E7 wirusa brodawczaka ludzkiego za pomocą systemu CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y. i in., SEC61G sprzyja proliferacji raka szyjki macicy poprzez aktywację szlaku sygnałowego MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A. i in., Potencjał przeciwnowotworowy ekstraktów owocowych z Vatica diospyroides typu Symington SS oraz ich wpływ na programowaną śmierć komórkową linii komórkowych raka szyjki macicy. The Scientific World Journal, 2019. 2019.