Komórki KC
Informacje ogólne
| Opis | KC (Kc167) to linia komórek embrionalnych Drosophila melanogaster pochodząca z embrionu samicy w stadium zamknięcia grzbietowego, zarejestrowana w bazie Cellosaurus pod oznaczeniem CVCL_Z833. Linia ta została pierwotnie wyhodowana i jest szeroko stosowana w biologii komórkowej Drosophila, badaniach genetycznych oraz genomice funkcjonalnej. Komórki Kc167 zostały uwiecznione za pomocą wirusa SV40 i rosną w sposób półprzylegający, tworząc mieszaną populację komórek przylegających i luźno unoszących się w hodowli. Należą one do najlepiej scharakteryzowanych linii komórkowych Drosophila i w pełni nadają się do wyciszania genów za pomocą RNAi, co czyni je podstawowym modelem do badań przesiewowych z wykorzystaniem RNAi w skali całego genomu w biologii bezkręgowców. Komórki KC mają zastosowanie w biologii komórkowej Drosophila, badaniach przesiewowych z wykorzystaniem RNAi i CRISPR obejmujących cały genom, badaniach szlaków transdukcji sygnału (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), badaniach nad odpornością wrodzoną oraz badaniach porównawczych szlaków zachowanych w procesie ewolucji. W pełni zsekwencjonowany i opatrzony adnotacjami genom Drosophila, w połączeniu z obszernymi publicznymi bazami danych odczynników RNAi (np. DRSC/TRiP), sprawia, że komórki KC są szczególnie skuteczne w bezstronnym odkrywaniu genomiki funkcjonalnej. Ze względu na unieśmiertelnienie wirusem SV40 komórki te podlegają klasyfikacji BSL-2. Komórki KC hoduje się w pożywce Schneidera dla Drosophila, uzupełnionej 2 mM glutaminą i 10% FBS. Co istotne, linie komórkowe Drosophila hoduje się w temperaturze 25°C w powietrzu atmosferycznym bez CO₂ (a nie w temperaturze 37°C / 5% CO₂, jak w przypadku komórek ssaków). Komórki są poddawane pasażowaniu poprzez delikatne zawieszenie i rozcieńczenie (wzrost póładhezyjny). Pożywkę wymienia się lub komórki rozcieńcza co 2–3 dni. |
|---|---|
| Organizm | Drosophila melanogaster (muszka owocówka) |
| Tkanka | Zarodek |
| Choroba | Normalny |
| Miejsce przerzutu | Zarodek (etap zamknięcia grzbietowego) |
| Zastosowania | Biologia komórkowa Drosophila; badania przesiewowe z wykorzystaniem RNAi obejmujące cały genom; badania przesiewowe z wykorzystaniem CRISPR; transdukcja sygnału (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); odporność wrodzona; genomika funkcjonalna bezkręgowców |
| Synonimy | KC, K C |
Charakterystyka
| Wiek | Etap zamykania grzbietowego |
|---|---|
| Płeć | Kobieta |
| Morfologia | Półprzylegający, podobny do nabłonka |
| Typ komórki | Komórki embrionalne |
| Właściwości wzrostu | częściowo przylegający |
Dane regulacyjne
| Cytat | KC (numer katalogowy Cytion 300604) |
|---|---|
| Poziom bezpieczeństwa biologicznego | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z833 |
| Status GMO | GMO-S2: Ta linia komórkowa Drosophila zawiera stabilnie zintegrowaną kasetę nieśmiertelności wirusa SV40. Wymagane jest zabezpieczenie na poziomie BSL-2. Klasyfikacja ta obowiązuje wyłącznie na terenie Niemiec i może różnić się w innych krajach. |
Dane biomolekularne
| Podatność na wirusa | SV40 uodporniony |
|---|
Obsługa
| Podłoże hodowlane | Pożywka Schneidera dla muszek owocówek + 2 mM glutaminy + 10% surowicy płodowej bydlęcej (FBS). |
|---|---|
| Suplementy | Do pożywki należy dodać 2 mM glutaminy i 10% FBS |
| Odczynnik dysocjacyjny | Nie jest wymagane (póładhezyjne; delikatnie zawiesić w roztworze) |
| Czas podwojenia | ok. 24–48 godzin |
| Subkultury | Delikatnie pipetować hodowlę, aby ponownie zawiesić komórki półprzylegające. Przenieść odpowiednią objętość do nowej kolby i dodać świeżą, wstępnie podgrzaną pożywkę Schneidera. Rozcieńczyć do gęstości od 5 × 10⁵ do 1 × 10⁶ komórek/ml. Inkubować w temperaturze 25°C w powietrzu atmosferycznym bez CO₂. |
| Współczynnik podziału | od 1 do 3 |
| Gęstość siewu | od 5 × 10⁵ do 1 × 10⁶ komórek/ml |
| Odnawianie płynów | Co 2 do 3 dni |
| Środek zamrażający | Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją. |
| Rozmrażanie i hodowla komórek |
|
| Atmosfera inkubacji | 25°C, powietrze otoczenia (nie wymaga CO₂). |
| Warunki wysyłki | Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania. |
| Warunki przechowywania | W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu. |
Kontrola jakości i analiza molekularna
Umowa transferu materiałów
Jeśli zamierzają Państwo wykorzystywać linie komórkowe Cytion wyłącznie do badań wewnętrznych w jednym ośrodku badawczym, prosimy o wypełnienie i podpisanie naszej umowy o transferze materiałów (MTA) oraz przesłanie jej wraz z zamówieniem.
W przypadku wszelkich zastosowań komercyjnych — w tym między innymi prac wykonywanych za wynagrodzeniem, testów kontroli jakości, wprowadzania produktów na rynek, zastosowań diagnostycznych lub badań regulacyjnych — prosimy o wypełnienie formularza przeznaczenia, abyśmy mogli przygotować umowę dostosowaną do Państwa projektu.
Uwaga: Umowa MTA dotyczy tylko niektórych linii komórkowych. Jeśli ta informacja i dokument MTA pojawiają się na stronie produktu, umowa ma zastosowanie. W przypadku linii komórkowych nieobjętych umową MTA nie będzie wyświetlana żadna informacja o umowie. Umowa MTA nie obowiązuje klientów z Ameryki, Chin i Tajwanu. Aby otrzymać odpowiednią umowę, skontaktuj się z naszym oddziałem w Stanach Zjednoczonych.