U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ląstelės
800,00 €*
Produktai yra siunčiami užšaldyti sausojo ledo kriotubose. Kiekvienoje kriotuboje paprastai yra 3 × 10 6 ląstelių adhezyvinių linijų atveju arba 5 × 106 ląstelių suspensijos linijų atveju (išsami informacija pateikta partijos CoA).
Bendra informacija
| Aprašymas | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 yra genomo redaguota žmogaus osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš U2OS ląstelių, kuriose endogeninis SEH1L (SEH1) genas buvo modifikuotas naudojant CRISPR/Cas9 technologiją, kad koduotų in-frame SNAPf žymę. SEH1 yra Y komplekso (taip pat žinomo kaip NUP107-160 kompleksas) komponentas, branduolinio porų komplekso (NPC) pagrindinis struktūrinis modulis, kuris prisideda prie porų karkaso surinkimo ir stabilumo. Įterpiant SNAPf kodavimo seką į endogeninį lokusą, žymėtas SEH1 baltymas yra ekspresuojamas pagal natūralų reguliavimo kontrolę, išlaikant fiziologinius ekspresijos lygius ir sumažinant branduolinio porų sudėties sutrikimus. SNAPf žymė yra inžinerinis, greitai reaguojantis SNAP žymės variantas, kuris kovalentiškai jungiasi su benzilguaninu konjuguotais substratais, leidžiantis selektyvų ir stabilų fluorescencinį žymėjimą gyvose arba fiksuotose ląstelėse. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ląstelėse jungtinis baltymas lokalizuojasi branduolinėje apvalkale, būdingame NPC pasiskirstymui. Kadangi žymėjimas vyksta endogeninių baltymų lygiu, ši sistema puikiai tinka kiekybinei fluorescencinei mikroskopijai, super-rezoliucijos vaizdams ir vienos dalelės sekimo analizėms, kurių tikslas yra išanalizuoti NPC organizavimą ir stechiometriją. Plokščia morfologija ir dideli U2OS ląstelių branduoliai dar labiau palengvina branduolinės apvalkalo struktūrų vizualizavimą aukšta rezoliucija. SEH1 dalyvauja NPC biogenezėje ir taip pat yra susijęs su kinetochorais susijusiais procesais mitozės metu. Atitinkamai, ši ląstelių linija suteikia tvirtą platformą ląstelių ciklo priklausomo NPC surinkimo ir išardymo, Y-komplekso erdvinės organizacijos porų karkase ir potencialių SEH1 dvigubų vaidmenų branduolinėje apvalkale ir mitoziniuose kinetochoruose tyrimams. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 leidžia atlikti mechanistinius branduolinės poros architektūros ir dinamikos tyrimus fiziologiškai reikšmingomis ekspresijos sąlygomis. |
|---|---|
| Organizmas | Žmogus |
| Audiniai | Kaulas |
| Liga | Osteosarkoma |
Charakteristikos
| Amžius | 15 metų |
|---|---|
| Lytis | Moteris |
| Etniškumas | Kaukaziečių |
| Morfologija | Į epitelį panašus |
| Augimo savybės | Prigludęs |
Reguliavimo duomenys
| Citavimas | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion katalogo numeris 300664) |
|---|---|
| Biologinės saugos lygis | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Indėlininkas | Ellenbergo laboratorija (EMBL) |
| GMO statusas | GMO-S1: šioje žmogaus osteosarkomos ląstelių linijoje (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) yra CRISPR tarpininkaujama SNAPf-SEH1 sintezė, leidžianti selektyviai žymėti SEH1 nukleoporiną. Modifikacija yra stabili. Ši klasifikacija taikoma tik Vokietijoje ir gali skirtis kitose šalyse. |
Biomolekuliniai duomenys
| Baltymų raiška | SEH1, SNAPf žymuo |
|---|
Tvarkymas
| Kultūros terpė | McCoys 5a, w: 3,0 g/l gliukozės, w: stabilus glutaminas, w: 2,0 mM natrio piruvatas, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820200a) |
|---|---|
| Maisto papildai | Papildykite terpę 10 % FBS, 3,0 g/l gliukozės, stabiliu glutaminu, 2,0 mM natrio piruvato, 2,2 g/l NaHCO3, 1 % NEAA |
| Disociacijos reagentas | Accutase |
| Subkultūrinimas | Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė. |
| Užšaldyti terpę | Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas. |
| Ląstelių atšildymas ir kultivavimas |
|
| Inkubacijos atmosfera | 37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje. |
| Flakono danga | Kad po atšildymo būtų užtikrintas optimalus prisitvirtinimas ir gyvybingumas, rekomenduojame naudoti kolagenu dengtas kolbas arba plokšteles. |
| Užšaldymo procedūra | Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą. |
| Pristatymo sąlygos | Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą. |
| Laikymo sąlygos | Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą. |
Kokybės kontrolė / Genetinis profilis / HLA
| Sterilumas | Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus. Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos. |
|---|