KC ląstelės
Bendra informacija
| Aprašymas | KC (Kc167) – tai „Drosophila melanogaster“ embrioninė ląstelių linija, gauta iš patelės embriono, esant nugaros užsidarymo stadijai, registruota „Cellosaurus“ duomenų bazėje kaip CVCL_Z833. Ši linija buvo sukurta ir plačiai naudojama „Drosophila“ ląstelių biologijoje, genetiniuose tyrimuose ir funkcinėje genomikoje. Kc167 ląstelės buvo imortalizuotos naudojant SV40 ir auga pusiau adhezyviai, sudarančios mišrią prisitvirtinusių ir laisvai plūduriuojančių ląstelių populiaciją. Jos yra vienos iš geriausiai apibūdintų „Drosophila“ ląstelių linijų ir puikiai tinka RNRi tarpininkaujamam genų nutildymui, todėl yra pagrindinis modelis genomo masto RNRi atrankoms bestuburių biologijoje. KC ląstelės tinka naudoti „Drosophila“ ląstelių biologijoje, visą genomą apimančiuose RNAi ir CRISPR tyrimuose, signalų perdavimo kelių tyrimuose (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), įgimto imuniteto tyrimuose ir evoliuciškai išlikusių kelių lyginamuosiuose tyrimuose. Visiškai sekvenuotas ir anotuotas „Drosophila“ genomas, kartu su išsamiomis viešomis RNAi reagentų duomenų bazėmis (pvz., DRSC/TRiP), daro KC ląsteles ypač galingą įrankį nešališkiems funkcinių genomų atradimams. Dėl SV40 imortalizacijos joms taikoma BSL-2 klasifikacija. KC ląstelės auginamos Schneiderio „Drosophila“ terpėje, papildytoje 2 mM glutaminu ir 10 % FBS. Svarbiausia, kad „Drosophila“ ląstelių linijos auginamos 25 °C temperatūroje aplinkos ore be CO₂ (o ne 37 °C / 5 % CO₂, kaip žinduolių ląstelės). Ląstelės perkeliamos švelniai jas resuspenduojant ir praskiedžiant (pusiau adhezyvus augimas). Terpė keičiama arba ląstelės praskiedžiamos kas 2–3 dienas. |
|---|---|
| Organizmas | Drosophila melanogaster (vaisinė musė) |
| Audiniai | Embrionas |
| Liga | Normalus |
| Metastazės vieta | Embrionas (nugaros užsidarymo stadija) |
| Paraiškos | „Drosophila“ ląstelių biologija; visą genomą apimantys RNRi tyrimai; CRISPR tyrimai; signalų perdavimas (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); įgimtas imunitetas; bestuburių funkcinė genomika |
| Sinonimai | KC, K C |
Charakteristikos
| Amžius | Nugaros užsidarymo etapas |
|---|---|
| Lytis | Moteris |
| Morfologija | Pusiau prilipęs, epitelio tipo |
| Ląstelės tipas | Embrioninės ląstelės |
| Augimo savybės | pusiau prilipantis |
Reguliavimo duomenys
| Citavimas | KC (Cytion katalogo numeris 300604) |
|---|---|
| Biologinės saugos lygis | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z833 |
| GMO statusas | GMO-S2: Ši „Drosophila“ ląstelių linija turi stabiliai integruotą SV40 nemirtingumo kasetę. Būtina taikyti BSL-2 saugos lygį. Ši klasifikacija galioja tik Vokietijoje ir kitose šalyse gali skirtis. |
Biomolekuliniai duomenys
| Jautrumas virusams | SV40, įgijęs nemirtingumą |
|---|
Tvarkymas
| Kultūros terpė | Schneiderio Drosophila terpė + 2 mM glutaminas + 10 % veršelių serumo (FBS). |
|---|---|
| Maisto papildai | Į terpę įpilkite 2 mM glutamino ir 10 % FBS |
| Disociacijos reagentas | Nereikalinga (pusiau prilipusi; atsargiai išmaišykite) |
| Padvigubėjimo laikas | maždaug nuo 24 iki 48 valandų |
| Subkultūrinimas | Švelniai pipetuokite kultūrą, kad vėl suspenduotumėte pusiau prilipusias ląsteles. Perkelkite reikiamą tūrį į naują kolbą ir įpilkite šviežios, iš anksto pašildytos Schneiderio terpės. Praskieskite iki tankio nuo 5 × 10⁵ iki 1 × 10⁶ ląstelių/ml. Inkubuokite 25 °C temperatūroje aplinkos ore be CO₂. |
| Padalijimo santykis | 1–3 |
| Sėjos tankis | nuo 5 × 10⁵ iki 1 × 10⁶ ląstelių/ml |
| Skysčių atnaujinimas | Kas 2-3 dienas |
| Užšaldyti terpę | Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas. |
| Ląstelių atšildymas ir kultivavimas |
|
| Inkubacijos atmosfera | 25 °C, aplinkos oro temperatūra (CO₂ nereikia). |
| Pristatymo sąlygos | Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą. |
| Laikymo sąlygos | Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą. |
Kokybės kontrolė ir molekulinė analizė
Medžiagų perdavimo sutartis
Jei ketinate naudoti Cytion ląstelių linijas tik vidiniams tyrimams vienoje tyrimų vietoje, užpildykite ir pasirašykite mūsų medžiagų perdavimo sutartį (MTA) ir pateikite ją kartu su užsakymu.
Bet kokiam komerciniam naudojimui, įskaitant, bet neapsiribojant, mokamais paslaugų darbais, kokybės kontrolės bandymais, produktų išleidimu, diagnostiniu naudojimu ar reguliavimo tyrimais, užpildykite numatomo naudojimo formą, kad galėtume parengti jūsų projektui pritaikytą sutartį.
Atkreipkite dėmesį: MTA taikoma tik tam tikroms ląstelių linijoms. Jei šis pranešimas ir MTA dokumentas yra pateikti produkto puslapyje, sutartis yra taikoma. Ląstelių linijoms, kurioms MTA netaikoma, nuoroda į sutartį nebus rodoma. MTA negalioja klientams Amerikoje, Kinijoje ar Taivane. Norėdami gauti atitinkamą sutartį, susisiekite su mūsų JAV padaliniu.