HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP ląstelės

800,00 €*

Produktai yra siunčiami užšaldyti sausojo ledo kriotubose. Kiekvienoje kriotuboje paprastai yra 3 × 10 ⁶ ląstelių adhezyvinių linijų atveju arba 5 × 10⁶ ląstelių suspensijos linijų atveju (išsami informacija pateikta partijos CoA).

Kainos be mokesčių ir pristatymo išlaidų

cryovial

Produkto numeris: 301569

Saugos duomenų lapas

Produkto lapas

Trečiosios šalies susitarimas

Aprašymas	HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP ląstelių linija yra Hela Kyoto ląstelių modelis, sukurtas naudojant CRISPR-Cas9 technologiją. Šioje ląstelių linijoje į CAP-H2 geną, kuris yra kondensino II komplekso, dalyvaujančio chromosomų segregacijoje ir kondensacijoje mitozės metu, dalis, įterptas mEGFP (monomerinis sustiprintas žaliasis fluorescencinis baltymas). MEGFP žymė leidžia tyrėjams vizualiai stebėti kondensino II dinamiką ląstelės dalijimosi metu. Ši ląstelių linija yra naudinga mitozės procesams, chromosomų architektūrai ir genų reguliacijai tirti. MEGFP žymeklis leidžia atlikti tiesioginį ląstelių vaizdavimą ir realiuoju laiku stebėti CAP-H2 baltymo funkciją. Šis modelis padeda tirti molekulinius ląstelių ciklo progresavimo ir chromosomų vientisumo mechanizmus, padeda suprasti genetinius sutrikimus ir kurti gydymo strategijas.
Organizmas	Žmogus
Audiniai	Endocervix
Liga	Adenokarcinoma
Sinonimai	HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP #67, HK CRISPR CAP-H2-mEGFP

Amžius	30 metų
Lytis	Moteris
Etniškumas	Afroamerikietis
Morfologija	Į epitelį panašios ląstelės su mozaikos formos akmenukais
Augimo savybės	Prigludęs

Citavimas	HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP (Cytion katalogo numeris 301569)
Biologinės saugos lygis	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_UR45
Indėlininkas	Ellenbergo laboratorija (EMBL)
GMO statusas	GMO-S1: šioje HeLa Kyoto linijoje yra CRISPR integruota mEGFP žymė CAP-H2 lokuse, padedanti atlikti chromosomos struktūros analizę. Ši klasifikacija taikoma tik Vokietijoje ir gali skirtis kitose šalyse.

Produktai	EGFP (sustiprintas žaliasis fluorescuojantis baltymas)

Kultūros terpė	DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Maisto papildai	Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas	Accutase
Subkultūrinimas	Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Skysčių atnaujinimas	2-3 kartus per savaitę
Užšaldyti terpę	Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Ląstelių atšildymas ir kultivavimas	Patikrinkite, ar pristatant buteliuką jis išlieka gerai užšaldytas, nes ląstelės gabenamos ant sauso ledo, kad gabenimo metu būtų palaikoma optimali temperatūra. Gavę iš karto laikykite kriovialą žemesnėje nei -150 °C temperatūroje, kad užtikrintumėte ląstelių vientisumo išsaugojimą, arba pereikite prie 3 veiksmo, jei reikia nedelsiant kultivuoti. Jei norite nedelsiant pradėti kultivuoti, greitai atšildykite buteliuką panardindami jį į 37 °C temperatūros vandens vonelę su švariu vandeniu ir antimikrobine priemone, švelniai maišydami 40-60 sekundžių, kol liks nedidelis ledo gabalėlis. Visus tolesnius veiksmus atlikite steriliomis sąlygomis srauto gaubte, prieš atidarydami kriovialą dezinfekuokite jį 70 % etanoliu. Atsargiai atidarykite dezinfekuotą buteliuką ir perpilkite ląstelių suspensiją į 15 ml centrifugos mėgintuvėlį, kuriame yra 8 ml kambario temperatūros mitybinės terpės, atsargiai išmaišykite. Mišinį centrifuguokite 300 x g greičiu 3 minutes, kad atsiskirtų ląstelės, ir atsargiai išmeskite supernatantą su šaldymo terpės likučiais. Švelniai resuspenduokite ląstelių granules 10 ml šviežios mitybinės terpės. Jei ląstelės yra prigludusios, suspensiją padalykite į dvi T25 kolbas; jei tai suspensinės kultūros, visą terpę perkelkite į vieną T25 kolbą, kad paskatintumėte veiksmingą ląstelių sąveiką ir augimą. Laikykitės nustatytų subkultūrų protokolų, kad ląstelių linija nuolat augtų ir būtų palaikoma, taip užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Inkubacijos atmosfera	37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.
Flakono danga	Nėra
Užšaldymo procedūra	Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.
Pristatymo sąlygos	Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.
Laikymo sąlygos	Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Sterilumas	Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus. Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Atkreipkite dėmesį, kad ši ląstelių linija nėra prieinama pagal standartinį "Cytion" MTA, nes tam reikia trečiosios šalies susitarimo ir (arba) dėl jos reikia derėtis su pirminiu licencijos teikėju.

HK-CRISPR-CAP-H2-mEGFP ląstelės

Bendra informacija

Charakteristikos

Reguliavimo duomenys

Biomolekuliniai duomenys

Tvarkymas

Kokybės kontrolė / Genetinis profilis / HLA

Trečiosios šalies susitarimas