HEK293-CLDN18.2 ląstelės

"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra naujausia kriokonservavimo terpė, sukurta siekiant užtikrinti aukščiausio lygio ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo. Ši universali terpė tinka įvairiems ląstelių tipams, įskaitant ir žmogaus, ir gyvūnų ląsteles, todėl ji yra labai svarbi priemonė įvairiems tyrimams. Sudaryta iš kruopščiai subalansuoto krioprotektorių ir pagrindinių maistinių medžiagų derinio, užšaldymo terpė CM-1 sumažina ledo kristalų susidarymą ir ląstelių stresą šaldymo proceso metu, todėl išsaugo ląstelių vientisumą.
Pagrindinės "Freeze Medium CM-1" savybės:

Platus suderinamumas: Veiksminga įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir nustatytas ląstelių linijas.
Didelis gyvybingumas: Optimizuota taip, kad po atšildymo ląstelės kuo geriau atsistatytų ir taptų gyvybingos, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Paruošta naudoti: Patogiai paruoštos ir sterilizuotos, kad būtų galima iš karto naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika.
Geresnis stabilumas: Išlaikomas pastovus veikimas standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrinant atkuriamus rezultatus.
Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų.


CM-1 naudojimas ląstelėms šaldyti

Norėdami naudoti CM-1 adherentinėms ir suspensijos ląstelėms užšaldyti, atlikite šiuos veiksmus

Jei ląstelės yra adherentinės, nuplaukite ir atskirkite jas nuo kultūros substrato. Jei tai yra suspensijos ląstelės, pereikite tiesiai prie kito veiksmo.
Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jos yra tinkamos koncentracijos.
Centrifuguokite ląsteles, kad jos subyrėtų, tada vėl ištirpinkite CM-1 užšaldymo terpėje.
Resuspenduotas ląsteles perkelkite į kriokameras.
Prieš perkeldami ląsteles į ilgalaikį saugojimą, naudokite lėto šaldymo metodą





Metodas
Aprašymas
Žingsniai





❄️
Rankinis užšaldymas

Žingsnis po žingsnio taikomas metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama, kad būtų užtikrintas ląstelių gyvybingumas

1️⃣ Įdėkite ląsteles į užšaldymo terpę ir 40 min. palaikykite 4 °C temperatūros šaldiklyje.
2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms.
3️⃣ Ilgalaikiam saugojimui ląsteles laikykite skystame azote



❄️
"Mr. Frosty" naudojimas

Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos

1️⃣ Paruoškite ląsteles kriokūnelėse su užšaldymo terpe.
2️⃣ Įdėkite kriovialus į "Mr. Frosty" konteinerį.
3️⃣ Prieš perkeliant į skystą azotą, 24 valandas laikykite -80 °C temperatūroje



❄️
Kontroliuojamo greičio šaldiklis

Labai tikslus "Thermo Fisher" ar kitų gamintojų šaldiklis, skirtas kontroliuojamam temperatūros sumažinimui

1️⃣ Užprogramuokite prietaisą taip, kad jis palaipsniui mažintų temperatūrą.
2️⃣ Į šaldiklį įdėkite paruoštas ląsteles.
3️⃣ Po šaldymo ciklo ląsteles perkelkite į skystą azotą









Laikykite kriokūnelius žemesnėje nei -130 °C temperatūroje arba skystame azote, kad būtų galima ilgai saugoti.


Sudėtis

Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų
Buferinė geba: pH = 7,2-7,6


"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra patikimas kriokonservavimo sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiems tyrimams.

"Ham's F-12" terpė, dar žinoma kaip "Ham's F-12 Nutrient Mix", yra plačiai naudojama bazinė terpė, specialiai sukurta ląstelių kultūroms. Ji plačiai naudojama be serumo, vienaląstelėms Kinijos žiurkėnų kiaušinėlių (CHO) ląstelėms, plaučių ląstelėms ir pelių L ląstelėms dėti. Be to, Ham's F-12 yra terpė, kuri pasirenkama atliekant kloninio toksiškumo tyrimą (CTA).
Vienas iš svarbiausių jos privalumų
- galimybė palaikyti ląstelių augimą be serumo papildymo. Taip pašalinami galimi serumo komponentų sukeliami trukdžiai ir užtikrinami nuoseklūs ir patikimi eksperimentų rezultatai. Suteikdama kultūrų aplinką be serumo, Ham's F-12 terpė suteikia tyrėjams didesnę tyrimų kontrolę.
Kita svarbi "Ham's F-12" terpės savybė
- jos tinkamumas pavienių ląstelių dengimui. Dėl to ji puikiai tinka įvairioms ląstelių linijoms, įskaitant CHO ląsteles, plaučių ląsteles ir pelių L ląsteles. Optimizuota terpės maistinių medžiagų sudėtis palengvina efektyvų atskirų ląstelių prisitvirtinimą ir augimą, todėl galima sukurti homogenines ląstelių kultūras, kurių atkuriamumas yra geresnis.
Be to, "Ham's F-12" terpė pripažinta kaip tinkamiausia terpė, skirta kloninio toksiškumo tyrimui (CTA) atlikti. Šis tyrimas yra labai svarbus vertinant citotoksinį medžiagų poveikį ląstelėms. Naudodami Ham's F-12 terpę CTA, tyrėjai gali tiksliai įvertinti įvairių junginių ar gydymo būdų poveikį atskiroms ląstelėms ir gauti vertingų įžvalgų apie toksikologinius profilius.
Kokybės kontrolė

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.

Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.

Sudėtis




Sudedamosios dalys
mg/l


Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
44,00



Vario(II) sulfatas x 5H2O
0,00



Geležies (II) sulfatas x 7H2O
0,83



Magnio chloridas x 6H2O
122,00



Kalio chloridas
223,65



Natrio chloridas
7599,00



natrio vandenilio fosfatasbevandenis
142,04



Cinko sulfatas x 7H2O
0,86


Kiti komponentai
D(+)-gliukozė, bevandenė
1801,60



Hipoksantinas
4,08



Linolo rūgštis
0,08



DL-α-lipoinė rūgštis
0,21



Raudonasis fenolis
1,20



Putrescinas x 2HCl
0,16



Natrio piruvatas
110,00



Timidinas
0,73



NaHCO3
1176,00


Aminorūgštys
L-alaninas
8,91



L-argininas x HCl
210,70



L-asparaginas x H2O
15,01



L-asparagino rūgštis
13,31



L-cisteinas x HCl x H2O
35,12



L-alanil-L-gliutaminas
217,30



L-gliutamo rūgštis
14,71



Glicinas
7,51



L-histidinas x HCl x H2O
20,96



L-izoleucinas
3,94



L-leucinas
13,12



L-lizinas x HCl
36,54



L-metioninas
4,48



L-fenilalaninas
4,96



L-prolinas
34,53



L-serinas
10,51



L-treoninas
11,91



L-triptofanas
2,04



L-tirozinas
5,44



L-Valinas
11,71


Vitaminai
D(+)-biotinas
0,01



D-kalcio pantotenatas
0,24



Cholino chloridas
13,96



Folio rūgštis
1,32



mio-izitolis
18,02



Nikotinamidas
0,04



Piridoksinas x HCl
0,06



Riboflavinas
0,04



Tiaminas x HCl
0,34



Vitaminas B12
1,36

„Accutase“ ląstelių atskyrimo tirpalas su EDTA ir fenolio raudonuoju – 100 ml

„Accutase“ yra paruoštas naudoti, steriliai filtruotas ląstelių atskyrimo tirpalas, sukurtas kaip švelni alternatyva tripsinui/EDTA, skirtas adhezyvinių žinduolių ląstelių atskyrimui nuo standartinių audinių kultūros plastikinių indų ir adhezyviniu sluoksniu padengtų paviršių. Jis derina proteolitinį ir kolagenolitinį fermentų aktyvumą subalansuotame druskos tirpale, kad užtikrintų veiksmingą, tačiau kontroliuojamą atskyrimą, išsaugant ląstelių paviršiaus baltymus ir palaikant aukštą gyvybingumą po perėjimo bei greitą pakartotinį prisijungimą.

„Accutase“ sudėtis pagrįsta Dulbecco fosfato buferiniu tirpalu (DPBS) su EDTA ir fenolio raudonuoju kaip vizualiu pH indikatoriumi. Fermentai yra ne žinduolių ir ne bakterijų kilmės, todėl „Accutase“ ypač tinka kamieninių ląstelių tyrimams, vakcinų gamybos procesams ir bet kokiam naudojimui, kur reikia kuo labiau sumažinti gyvūninės ar mikrobiologinės kilmės teršalus. Tirpalas savaime slopina veiklą 37 °C temperatūroje, todėl po atskyrimo nereikia neutralizuojančio reagento ar serumo turinčios terpės – ląstelės gali būti perkeltos tiesiai į šviežią terpę.

Pagrindinės savybės

Paruoštas naudoti 1x steriliai filtruotas skystis – nereikia skiesti ar atskiesti
Kombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis fermentų aktyvumas švelniam atskyrimui
Kiekviena partija standartizuota pagal nustatytą atskyrimo aktyvumą, siekiant užtikrinti partijų nuoseklumą
Nežinduolių ir nebakterinės kilmės fermentai
Savaiminis slopinimas 37 °C temperatūroje – nereikia neutralizuojančio tirpalo
Sudėtyje yra Dulbecco PBS su EDTA
Fenolio raudonasis įtrauktas kaip vizualus pH indikatorius
pH 6,8–7,8


Tipiniai taikymo atvejai
„Accutase“ švelniai atskiria įvairius adhezyvinius ir jautrius ląstelių tipus, įskaitant žmogaus embrionines kamienines ląsteles (hESCs), žmogaus indukuotas pluripotentines kamienines ląsteles (iPSCs), nervines kamienines ląsteles, pirminius neuronus ir įprastai kultivuojamas adhezyvines ląstelių linijas, tokias kaip HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ir A549. Tipiniai naudojimo atvejai:

Įprastinis prisitvirtinusių žinduolių ląstelių subkultūravimas ir perėjimas
Švelnus hESCs, iPSCs ir kitų jautrių linijų vienos ląstelės atskyrimas
Mėginių paruošimas srauto citometrijai ir FACS analizei
Ląstelių paviršiaus žymenų analizė, kai svarbus epitopo vientisumas
Ląstelių migracijos, proliferacijos ir apoptozės tyrimai
Ramybės tyrimai, atliekant serumo badą ir onkogenų transfekcijos tyrimus
Naviko ląstelių ir nervų kamieno ląstelių migracijos tyrimai
Gamybos masto didinimas bioreaktorių darbo srautais

Atliekant įprastinius darbus, užpilkite maždaug 10 ml „Accutase“ ant 75 cm2 kultūros paviršiaus ir inkubuokite 5–10 minučių kambario temperatūroje. Optimalus inkubacijos laikas turėtų būti nustatomas kiekvienai ląstelių linijai atskirai ir neturėtų viršyti vienos valandos. Prieš pridedant, nuplaukite ląstelių sluoksnį druskos tirpalu be Ca2+/Mg2+, pvz., DPBS be kalcio ir magnio, kad pašalintumėte serumo likučius ir dvivalenčius katijonus.

Naudojimas ir laikymas
Neatidarytą buteliuką laikykite užšaldytą -15 °C ar žemesnėje temperatūroje. Atšildykite kambario temperatūroje arba per naktį +2 °C – +8 °C temperatūroje. Neatšildykite „Accutase“ 37 °C vandens vonioje, nes aukšta temperatūra sumažina fermentų aktyvumą. Atšildžius tirpalą galima laikyti iki 2 mėnesių +2 °C – +8 °C temperatūroje; nelaikykite kambario temperatūroje. Prieš naudojimą nereikia iš anksto pašildyti reagento iki 37 °C – jį reikia tiesiogiai įpilti į nuplautas ląsteles kambario temperatūroje. Siekiant užtikrinti ilgą galiojimo laiką, rekomenduojama naudoti vienkartines alikvotas, kad būtų išvengta pakartotinių atšildymo ciklų. Visada dirbkite aseptinėmis sąlygomis.

Kokybė
Pagaminta laikantis griežtų kokybės standartų. Kiekviena „Accutase“ partija yra steriliškai filtruojama ir tikrinama dėl sterilumo, pH, išvaizdos ir disociacijos aktyvumo, siekiant užtikrinti nuoseklų, atkartojamą veikimą iš partijos į partiją.

Produkto specifikacijos



Specifikacija
Išsami



Produkto tipasLąstelių atskyrimo / disociacijos reagentas
FormatasSteriliai filtruotas skystis, paruoštas naudoti
Tūris100 ml
Darbinė koncentracija1x (paruoštas naudoti)
Fermentų aktyvumasKombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis
Fermentų kilmėNe iš žinduolių ir ne iš bakterijų
Buferinė sistemaDulbecco PBS su EDTA
pH indikatoriusFenolio raudonasis
pH diapazonas6,8 – 7,8
IšvaizdaSkaidrus, nuo šviesiai raudonos iki oranžinės spalvos tirpalas
Laikymo temperatūra-15 °C arba žemesnė
Stabilumas po atšildymoIki 2 mėnesių +2 °C iki +8 °C temperatūroje
Rekomenduojamas naudojimo tūris~10 ml 75 cm2 kultūros paviršiaus
Tipinis inkubacijos laikas5–10 minučių kambario temperatūroje
Pristatymo sąlygosUžšaldyta sausuoju ledu
PaskirtisTik moksliniams tyrimams ir tolesnei gamybai



Sudėtis (sudėtis viename litre)



Komponentas
Koncentracija (mg/l)




Neorganinės druskos

Natrio chloridas (NaCl)8000,00
Dinatrio hidrogenfosfatas (Na2HPO4)1150,00
Kalio chloridas (KCl)200,00
Kalio dihidrogeno fosfatas (KH2PO4)200,00

Kiti komponentai

EDTA · 4Na (tetranatrio EDTA)220,00
Fenolio raudonasis3,00
Patentuotas fermentų mišinys (proteolitinis ir kolagenolitinis aktyvumas)1x



„Accutase“ yra „Innovative Cell Technologies, Inc.“ registruotas prekės ženklas.

Produkto apžvalga
Tūris: 100 ml Laikymas: ≤-15°C Sterilumas: Sterilus filtras
Antibiotikų ir antimikotinių medžiagų tirpalas (100x ) yra sterilus, paruoštas naudoti koncentratas, skirtas sumažinti mikrobinio užteršimo riziką ląstelių kultūrose ir susijusiose laboratorijose. Šiame 100x tirpale yra gerai žinomas penicilino, streptomicino ir amfotericino B derinys, užtikrinantis plataus spektro antimikrobinį veikimą prieš gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, mieles ir gijinius grybelius. Preparatas tinka naudoti eukariotinių ląstelių kultūrose, bakterijų terpėse ir kitose užterštumui jautriose sistemose, taip užtikrinant švarią ir nuoseklią laboratorinę veiklą.
Taikymas ir privalumai Šis tirpalas, optimizuotas įprastiniams mokslinių tyrimų protokolams, plačiai naudojamas aseptinėms sąlygoms palaikyti ląstelių kultūrų darbo procesuose. Jis užtikrina patikimą veikimą užterštumui jautriose aplinkose, padėdamas tyrėjams sumažinti mikrobų peraugimo riziką, nepakenkiant ląstelių sveikatai ar eksperimentų atkuriamumui. Dėl steriliai filtruotos sudėties nereikia atlikti papildomų tirpinimo etapų, todėl galima supaprastinti terpės paruošimą ir sumažinti kasdienių laboratorinių procedūrų kintamumą.
Naudojimas ir suderinamumas Norint pasiekti standartinę darbinę koncentraciją, praskieskite tirpalą santykiu 1:100 į visą kultūros terpę. Produktas suderinamas su daugeliu žinduolių ląstelių linijų ir bazinių terpių. Nuolat turėdami atsargų, mokslininkai gali naudotis patikimu tiekimo tęstinumu ir supaprastintu logistikos planavimu. Tirpalas turi būti laikomas ≤ -15 °C temperatūroje ir saugomas nuo pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad išliktų stabilus. Skirtas tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.

Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS)
Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS) yra plačiai naudojamas buferinis tirpalas biologiniuose ir cheminiuose tyrimuose. Jis atlieka svarbų vaidmenį palaikant pH pusiausvyrą ir osmoliariškumą atliekant įvairias eksperimentines procedūras, įskaitant audinių apdorojimą ir ląstelių auginimą. Mūsų PBS tirpalas yra kruopščiai sukurtas iš didelio grynumo ingredientų, kad būtų užtikrintas kiekvieno eksperimento stabilumas ir patikimumas. Mūsų PBS tirpalo osmoliariškumas ir jonų koncentracija tiksliai atitinka žmogaus organizmo osmoliariškumą ir jonų koncentraciją, todėl jis yra izotoninis ir netoksiškas daugumai ląstelių.

Mūsų PBS tirpalo sudėtis
Mūsų PBS tirpalas yra pH sureguliuotas itin grynų fosfatinių buferių ir fiziologinių tirpalų mišinys. 1X darbinės koncentracijos tirpale yra:

8000 mg/l natrio chlorido (NaCl)
200 mg/l kalio chlorido (KCl)
1150 mg/l natrio fosfato dibazinio bevandenio (Na2HPO4)
200 mg/L Kalio fosfatas vienbazis bevandenis (KH2PO4)

Ši sudėtis užtikrina optimalią pH ir jonų pusiausvyrą, tinkančią įvairioms biologinėms reikmėms.

Mūsų PBS tirpalo taikymas
Mūsų PBS tirpalas idealiai tinka įvairioms biologinių tyrimų reikmėms. Dėl izotoninių ir netoksiškų savybių jis tinka medžiagoms skiesti ir ląstelių talpykloms skalauti. PBS tirpalai, kurių sudėtyje yra EDTA, efektyviai išlaisvina prisitvirtinusias ir susitelkusias ląsteles. Tačiau į PBS negalima dėti dvivalenčių metalų, pavyzdžiui, cinko, nes tai gali sukelti nuosėdų susidarymą. Tokiais atvejais rekomenduojama naudoti Good's buferius. Be to, mūsų PBS tirpalas yra priimtina alternatyva virusų transportavimo terpei RNR virusams, įskaitant SARS-CoV-2, transportuoti ir laikyti.

Kokybės kontrolė

Steriliai filtruotas


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +25 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite nuo 2 °C iki 25 °C temperatūroje ir sunaudokite per 24 mėnesius.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.

Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Druskos
Kalio chloridas
200



Kalio fosfatas monobazinis bevandenis
200



Natrio chloridas
8000



Natrio fosfatas dvibazis bevandenis
1150

Organizmas	Žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Chinese hamster ovary, non-neoplastic; genetically engineered for CXCR4 surface expression (medium-high expression level)

Organizmas	Žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Chinese hamster ovary, non-neoplastic; genetically engineered for CXCR7 (ACKR3) surface expression (medium-high expression level)

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Kinų žiurkėno kiaušidės ląstelės, neoplazminės; genetiškai modifikuotos, kad ant jų paviršiaus būtų išreikštas CTLA-4

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Kinų žiurkėno kiaušidės, neoplazminės; genetiškai modifikuotos taip, kad FOLR1 (folato receptorius alfa) būtų išreikštas ant paviršiaus

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Kinų žiurkėno kiaušidės ląstelės, neoplazminės; genetiškai modifikuotos, kad ant jų paviršiaus būtų išreikštas B7H3 (CD276)

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės
Liga	Kinų žiurkėno kiaušidės ląstelės, neoplazminės; genetiškai modifikuotos, kad ant jų paviršiaus būtų išreikštas CCR8

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės

Organizmas	Kinų žiurkėnas
Audiniai	Kiaušidės