CTX ląstelės

DMEM (Dulbeko modifikuota Eagle terpė) yra labai universali ir plačiai naudojama bazinė terpė, skirta įvairių žinduolių ląstelių auginimui biologiniuose tyrimuose. Tai ideali terpė pirminiams fibroblastams, neuronams, glijos ląstelėms, HUVEC, lygiųjų raumenų ląstelėms ir populiarioms ląstelių linijoms, tokioms kaip HeLa, 293, Cos-7 ir PC-12, auginti.
DMEM nuo kitų terpių skiriasi unikalia sudėtimi. Palyginti su originalia Eagle's Minimal Essential Medium terpe, joje keturis kartus padidinta aminorūgščių ir vitaminų koncentracija. Iš pradžių sukurta su mažu gliukozės kiekiu (1 g/l) ir natrio piruvatu, DMEM dažnai naudojama su didesniu gliukozės kiekiu, su natrio piruvatu arba be jo. Pažymėtina, kad DMEM sudėtyje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių, todėl ją reikia papildyti. Norint pasiekti optimalų augimą, įprasta DMEM papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS). Be to, DMEM naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema, todėl fiziologiniam pH palaikyti reikia 5-10 % CO2 aplinkos.
Dulbeko modifikuota "Eagle" terpė (DMEM) yra labai vertinama tarp apibrėžtų terpių, skirtų ląstelių ir audinių kultūroms, ir atitinka įvairių adherentinių ląstelių fenotipų augimo poreikius. Ji pranoksta originalią Eagle'o terpę, sukurtą 1950 m. vištienos ląstelėms auginti, nes yra patobulinta papildoma formulė, vadinama Dulbeko modifikacija. Dėl šios modifikacijos atrinktų aminorūgščių ir vitaminų kiekis, palyginti su originalia terpe, padidėja iki keturių kartų.
Ląstelių kultūrų srityje DMEM yra labai svarbi terpė įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir transformuotas ląsteles, auginti. Mokslininkai modifikuotą DMEM versiją taip pat naudoja įvairiems moksliniams tyrimams, pavyzdžiui, vaistų atradimui, audinių inžinerijai ir ląstelių signalinių kelių tyrimams.

Kokybės kontrolė

Steriliai filtruota


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, apsaugotoje nuo šviesos.
Atidarytą laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.


Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
Glicinas
30.00



L-argininas HCl
84.00



L-cistinas 2 HCl
62.57



L-glutaminas
584.00



L-histidinas HClH2O
42.00



L-izoleucinas
105.00



L-leucinas
105.00



L-lizinas HCl
146.00



L-metioninas
30.00



L-fenilalaninas
66.00



L-serinas
42.00



L-treoninas
95.00



L-triptofanas
16.00



L-tirozinas 2 Na 2H2O
103.79



L-Valinas
94.00


Vitaminai
Cholino chloridas
4.00



D-kalcio pantotenatas
4.00



Folio rūgštis
4.00



mio-izitolis
7.20



Nikotinamidas
4.00



Piridoksalio HCl
4.00



Riboflavinas
0.40



Tiamino HCl
4.00


Neorganinės druskos
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Kiti komponentai
D-gliukozė
4500.00



Fenolio raudonojo natrio druska
15.90



Natrio piruvatas
110.00

„Accutase“ ląstelių atskyrimo tirpalas su EDTA ir fenolio raudonuoju – 100 ml

„Accutase“ yra paruoštas naudoti, steriliai filtruotas ląstelių atskyrimo tirpalas, sukurtas kaip švelni alternatyva tripsinui/EDTA, skirtas adhezyvinių žinduolių ląstelių atskyrimui nuo standartinių audinių kultūros plastikinių indų ir adhezyviniu sluoksniu padengtų paviršių. Jis derina proteolitinį ir kolagenolitinį fermentų aktyvumą subalansuotame druskos tirpale, kad užtikrintų veiksmingą, tačiau kontroliuojamą atskyrimą, išsaugant ląstelių paviršiaus baltymus ir palaikant aukštą gyvybingumą po perėjimo bei greitą pakartotinį prisijungimą.

„Accutase“ sudėtis pagrįsta Dulbecco fosfato buferiniu tirpalu (DPBS) su EDTA ir fenolio raudonuoju kaip vizualiu pH indikatoriumi. Fermentai yra ne žinduolių ir ne bakterijų kilmės, todėl „Accutase“ ypač tinka kamieninių ląstelių tyrimams, vakcinų gamybos procesams ir bet kokiam naudojimui, kur reikia kuo labiau sumažinti gyvūninės ar mikrobiologinės kilmės teršalus. Tirpalas savaime slopina veiklą 37 °C temperatūroje, todėl po atskyrimo nereikia neutralizuojančio reagento ar serumo turinčios terpės – ląstelės gali būti perkeltos tiesiai į šviežią terpę.

Pagrindinės savybės

Paruoštas naudoti 1x steriliai filtruotas skystis – nereikia skiesti ar atskiesti
Kombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis fermentų aktyvumas švelniam atskyrimui
Kiekviena partija standartizuota pagal nustatytą atskyrimo aktyvumą, siekiant užtikrinti partijų nuoseklumą
Nežinduolių ir nebakterinės kilmės fermentai
Savaiminis slopinimas 37 °C temperatūroje – nereikia neutralizuojančio tirpalo
Sudėtyje yra Dulbecco PBS su EDTA
Fenolio raudonasis įtrauktas kaip vizualus pH indikatorius
pH 6,8–7,8


Tipiniai taikymo atvejai
„Accutase“ švelniai atskiria įvairius adhezyvinius ir jautrius ląstelių tipus, įskaitant žmogaus embrionines kamienines ląsteles (hESCs), žmogaus indukuotas pluripotentines kamienines ląsteles (iPSCs), nervines kamienines ląsteles, pirminius neuronus ir įprastai kultivuojamas adhezyvines ląstelių linijas, tokias kaip HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ir A549. Tipiniai naudojimo atvejai:

Įprastinis prisitvirtinusių žinduolių ląstelių subkultūravimas ir perėjimas
Švelnus hESCs, iPSCs ir kitų jautrių linijų vienos ląstelės atskyrimas
Mėginių paruošimas srauto citometrijai ir FACS analizei
Ląstelių paviršiaus žymenų analizė, kai svarbus epitopo vientisumas
Ląstelių migracijos, proliferacijos ir apoptozės tyrimai
Ramybės tyrimai, atliekant serumo badą ir onkogenų transfekcijos tyrimus
Naviko ląstelių ir nervų kamieno ląstelių migracijos tyrimai
Gamybos masto didinimas bioreaktorių darbo srautais

Atliekant įprastinius darbus, užpilkite maždaug 10 ml „Accutase“ ant 75 cm2 kultūros paviršiaus ir inkubuokite 5–10 minučių kambario temperatūroje. Optimalus inkubacijos laikas turėtų būti nustatomas kiekvienai ląstelių linijai atskirai ir neturėtų viršyti vienos valandos. Prieš pridedant, nuplaukite ląstelių sluoksnį druskos tirpalu be Ca2+/Mg2+, pvz., DPBS be kalcio ir magnio, kad pašalintumėte serumo likučius ir dvivalenčius katijonus.

Naudojimas ir laikymas
Neatidarytą buteliuką laikykite užšaldytą -15 °C ar žemesnėje temperatūroje. Atšildykite kambario temperatūroje arba per naktį +2 °C – +8 °C temperatūroje. Neatšildykite „Accutase“ 37 °C vandens vonioje, nes aukšta temperatūra sumažina fermentų aktyvumą. Atšildžius tirpalą galima laikyti iki 2 mėnesių +2 °C – +8 °C temperatūroje; nelaikykite kambario temperatūroje. Prieš naudojimą nereikia iš anksto pašildyti reagento iki 37 °C – jį reikia tiesiogiai įpilti į nuplautas ląsteles kambario temperatūroje. Siekiant užtikrinti ilgą galiojimo laiką, rekomenduojama naudoti vienkartines alikvotas, kad būtų išvengta pakartotinių atšildymo ciklų. Visada dirbkite aseptinėmis sąlygomis.

Kokybė
Pagaminta laikantis griežtų kokybės standartų. Kiekviena „Accutase“ partija yra steriliškai filtruojama ir tikrinama dėl sterilumo, pH, išvaizdos ir disociacijos aktyvumo, siekiant užtikrinti nuoseklų, atkartojamą veikimą iš partijos į partiją.

Produkto specifikacijos



Specifikacija
Išsami



Produkto tipasLąstelių atskyrimo / disociacijos reagentas
FormatasSteriliai filtruotas skystis, paruoštas naudoti
Tūris100 ml
Darbinė koncentracija1x (paruoštas naudoti)
Fermentų aktyvumasKombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis
Fermentų kilmėNe iš žinduolių ir ne iš bakterijų
Buferinė sistemaDulbecco PBS su EDTA
pH indikatoriusFenolio raudonasis
pH diapazonas6,8 – 7,8
IšvaizdaSkaidrus, nuo šviesiai raudonos iki oranžinės spalvos tirpalas
Laikymo temperatūra-15 °C arba žemesnė
Stabilumas po atšildymoIki 2 mėnesių +2 °C iki +8 °C temperatūroje
Rekomenduojamas naudojimo tūris~10 ml 75 cm2 kultūros paviršiaus
Tipinis inkubacijos laikas5–10 minučių kambario temperatūroje
Pristatymo sąlygosUžšaldyta sausuoju ledu
PaskirtisTik moksliniams tyrimams ir tolesnei gamybai



Sudėtis (sudėtis viename litre)



Komponentas
Koncentracija (mg/l)




Neorganinės druskos

Natrio chloridas (NaCl)8000,00
Dinatrio hidrogenfosfatas (Na2HPO4)1150,00
Kalio chloridas (KCl)200,00
Kalio dihidrogeno fosfatas (KH2PO4)200,00

Kiti komponentai

EDTA · 4Na (tetranatrio EDTA)220,00
Fenolio raudonasis3,00
Patentuotas fermentų mišinys (proteolitinis ir kolagenolitinis aktyvumas)1x



„Accutase“ yra „Innovative Cell Technologies, Inc.“ registruotas prekės ženklas.

Produkto apžvalga
Tūris: 100 ml Laikymas: ≤-15°C Sterilumas: Sterilus filtras
Antibiotikų ir antimikotinių medžiagų tirpalas (100x ) yra sterilus, paruoštas naudoti koncentratas, skirtas sumažinti mikrobinio užteršimo riziką ląstelių kultūrose ir susijusiose laboratorijose. Šiame 100x tirpale yra gerai žinomas penicilino, streptomicino ir amfotericino B derinys, užtikrinantis plataus spektro antimikrobinį veikimą prieš gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, mieles ir gijinius grybelius. Preparatas tinka naudoti eukariotinių ląstelių kultūrose, bakterijų terpėse ir kitose užterštumui jautriose sistemose, taip užtikrinant švarią ir nuoseklią laboratorinę veiklą.
Taikymas ir privalumai Šis tirpalas, optimizuotas įprastiniams mokslinių tyrimų protokolams, plačiai naudojamas aseptinėms sąlygoms palaikyti ląstelių kultūrų darbo procesuose. Jis užtikrina patikimą veikimą užterštumui jautriose aplinkose, padėdamas tyrėjams sumažinti mikrobų peraugimo riziką, nepakenkiant ląstelių sveikatai ar eksperimentų atkuriamumui. Dėl steriliai filtruotos sudėties nereikia atlikti papildomų tirpinimo etapų, todėl galima supaprastinti terpės paruošimą ir sumažinti kasdienių laboratorinių procedūrų kintamumą.
Naudojimas ir suderinamumas Norint pasiekti standartinę darbinę koncentraciją, praskieskite tirpalą santykiu 1:100 į visą kultūros terpę. Produktas suderinamas su daugeliu žinduolių ląstelių linijų ir bazinių terpių. Nuolat turėdami atsargų, mokslininkai gali naudotis patikimu tiekimo tęstinumu ir supaprastintu logistikos planavimu. Tirpalas turi būti laikomas ≤ -15 °C temperatūroje ir saugomas nuo pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad išliktų stabilus. Skirtas tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.