SiHa ląstelės – naujos perspektyvos gimdos kaklelio vėžio tyrimuose
SiHa ląstelės yra gimdos kaklelio vėžio ląstelės, plačiai naudojamos biomedicininiuose tyrimuose. Jos yra puikios transfekcijos šeimininkės, todėl tinka genų ekspresijos tyrimams. Dėl savo žmogaus kilmės ir sąsajos su gimdos kaklelio vėžiu šios ląstelės dažniausiai naudojamos vėžio biologijos, virusologijos ir vaistų kūrimo tyrimuose.
- Auginimo terpė
- SiHa ląstelių idealiam augimui naudojama „Eagle's minimum essential medium“ (EMEM) terpė, kurioje yra 10 % FBS, 2 mM L-glutamino, 2,2 g/l NaHCO3 ir „Earle's Balanced Salt Solution“ (EBSS). Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
- Padvigubėjimo laikas
- SiHa ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 17 valandų.
- Augimo tipas
- SiHa yra adhezyvinė ląstelių linija.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- „Cytion“ — Užsisakykite SiHa
Bendrosios SiHa ląstelių charakteristikos ir kilmė
Labai svarbu suprasti ląstelių linijos kilmę ir bendruosius požymius, nes tai daro įtaką jos naudojimui jūsų tyrimuose. Šio straipsnio skyriuje sužinosite apie SiHa ląstelių linijos kilmę, išskirtines savybes ir daug daugiau: Kas yra SiHa vėžio ląstelių linija? Kas yra SiHa ląstelės HPV? Kokia yra SiHa ląstelių linijos kilmė? Kokia yra SiHa morfologija?
- SiHa – gimdos kaklelio karcinomos ląstelių linija – buvo gauta iš pirminės gimdos biopsijos fragmentų, paimtų iš 55 metų amžiaus azijietės, sergančios plokščialąsteline vėžiu [1].
- SiHa ląstelių linija pasižymi hipertriploidiniu kariotipu. Daugumos ląstelių vidutinis chromosomų skaičius svyruoja nuo 69 iki 72. Tačiau apie 24 % ląstelių modalusis chromosomų skaičius yra 71.
- SiHa ląstelės yra žmogaus papilomos viruso 16 tipo teigiamos. Jose aptinkama apie 1–2 HPV genomo kopijas vienoje ląstelėje [2].
- Šios gimdos kaklelio vėžio ląstelės pasižymi epiteline morfologija.
SiHa ląstelių linija: informacija apie auginimą
Palaikyti ląstelių linijos kultūrą nėra lengva, kol nežinote visų svarbiausių jos auginimo aspektų. Turėtumėte žinoti: koks yra SiHa ląstelių padvigubėjimo laikas? Kas yra SiHa ląstelių terpė? Kaip auginti SiHa ląstelių liniją?
Pagrindiniai SiHa ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
SiHa ląstelių dauginimosi laikas yra maždaug 17 valandų.
Adhezyvinė ar suspensinė:
SiHa yra adhezyvinė ląstelių linija.
Subkultivavimo santykis:
SiHa ląstelių subkultivavimo santykis yra nuo 1:2 iki 1:4. Perkeliant ląsteles, adhezyvinės ląstelės nuplaunamos 1x PBS tirpalu. Įpilamas „Accutase“ tirpalas, ir ląstelės inkubuojamos 8–10 minučių kambario temperatūroje. Toliau įpilama auginimo terpės, o ląstelės centrifuguojamos. Ląstelių nuosėdos vėl suspenduojamos, o ląstelės supilamos į naują kolbą tolesniam auginimui.
Auginimo terpė:
SiHa ląstelių optimaliam augimui naudojama „Eagle’s minimum essential medium“ (EMEM) terpė, kurioje yra 10 % FBS, 2 mM L-glutamino, 2,2 g/l NaHCO₃ ir „Earle’s Balanced Salt Solution“ (EBSS). Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:
SiHa ląstelės laikomos 37 °C drėgname inkubatoriuje, kuriame tiekiamas 5 % CO₂.
Laikymas:
Užšaldytos SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių linijos ampulės ilgam laikui saugomos elektrinėje šaldymo kameroje esant žemesnei nei -150 °C temperatūrai arba skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
SiHa ląstelių užšaldymui naudojama CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpė. Ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo metodą, leidžiantį temperatūrai mažėti tik 1 °C per minutę, siekiant išsaugoti ląstelių gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldytos ląstelės 40–60 sekundžių laikomos 37 °C vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Po to įpilama šviežios auginimo terpės, o ląstelės centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai. Ląstelių nuosėdos vėl suspenduojamos, o ląstelės perpilamos į kultūrinę kolbą auginimui.
Biologinio saugumo lygis:
SiHa ląstelių kultūroms tvarkyti ir prižiūrėti reikalinga 1 lygio biologinio saugumo laboratorija.
SiHa ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
Kaip ir kitos žmogaus karcinomos ląstelių linijos, SiHa taip pat turi tam tikrų išskirtinių savybių, susijusių su tam tikrais privalumais ir trūkumais. Čia aptarėme keletą svarbiausių iš jų.
SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių linijos privalumai
- Gimdos kaklelio vėžio modelis
- Išgauta iš gimdos kaklelio plokščialąstelinės karcinomos.
- Naudojama gimdos kaklelio vėžio mechanizmų, augimo ir vystymosi tyrimams.
- Ekspresuoja p53+ ir pRB+ genus, susijusius su DNR remontu, ląstelių ciklo reguliavimu ir navikų slopinimu.
- Navikų formavimo potencialas
- SiHa ląstelės yra navikogeninės ir gali sukelti menkai diferencijuotus III laipsnio epidermoidinius navikus nuogosiose pelėse.
- Naudojamos in vivo vėžio tyrimams ir priešvėžinių gydymo būdų bandymams.
SiHa ląstelių trūkumai
- Proliferacijos greitis
- SiHa ląstelės greitai dauginasi, todėl gali išaugti per daug.
- Reikia dažnai atlikti pasėlių perėjimus, o tai didina genetinio nestabilumo riziką, kuri laikui bėgant gali paveikti ląstelių elgseną.
SiHa ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
SiHa ląstelių linija plačiai naudojama gimdos kaklelio vėžio tyrimuose. Čia aptariami keli konkretūs šios ląstelių linijos pritaikymai.
- Tyrimai, susiję su žmogaus papilomos virusu (ŽPV): SiHa ląstelės yra ŽPV 16 teigiamos, todėl jos yra vertingos tirti žmogaus papilomos viruso infekciją, jos molekulinius mechanizmus ir vaidmenį gimdos kaklelio vėžio atsiradime bei progresavime. Mokslininkai taip pat naudoja šias ląsteles, kad ištirtų viruso replikaciją, integraciją ir jo poveikį šeimininko ląstelių procesams. 2020 m. atliktame tyrime SiHa ląstelių linija buvo panaudota HPV E6/E7 onkoproteinų vaidmeniui gimdos kaklelio vėžio vystymuisi ištirti, taikant CRISPR technologiją. Rezultatai parodė, kad E6/E7 genų slopinimas sukėlė SiHa ląstelių augimo stabdymą ir apoptozę. Todėl šie virusiniai genai gali tapti svarbiais vaistų taikymo taikiniais kuriant terapijas, skirtas su HPV susijusiam gimdos kaklelio vėžiui gydyti [3].
- Vėžio biologija: SiHa ląstelės yra neįkainojamas modelis gimdos kaklelio vėžio biologijai tirti, įskaitant vėžio vystymąsi, progresavimą, metastazavimą ir invaziją. Mokslininkai naudoja šias ląsteles, siekdami ištirti genetines mutacijas ir pagrindinius molekulinius kelius, prisidedančius prie gimdos kaklelio vėžio vystymosi ir augimo; pavyzdžiui, viename tyrime, kuriame buvo naudojamos SiHa ląstelės, nustatyta, kad padidėjęs SEC61G (SEC61 translokono gama subvienetas) aktyvumas skatina gimdos kaklelio vėžio ląstelių proliferaciją, aktyvuodamas MAPK kaskadą [4].
- Vaistų atranka ir bandymai: „SiHa“ yra plačiai naudojama gimdos kaklelio vėžio ląstelių linija, skirta įvertinti potencialių priešvėžinių vaistų, skirtų būtent su ŽPV susijusiam gimdos kaklelio vėžiui, veiksmingumą. Mokslininkai, naudodami šias ląsteles, tiria vaistų antiproliferacinį, apoptozinį ir antimetastazinį potencialą. Pavyzdžiui, 2019 m. atliktame tyrime buvo tiriamas „Vatica diospyroides Symington Type SS“ vaisių ekstraktų citotoksinis potencialas SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių linijoje [5].
„SiHa“ ląstelės jūsų tyrimams!
Moksliniai straipsniai, kuriuose nagrinėjamos SiHa ląstelės
Kai kuriuose reikšminguose ir dažnai cituojamuose moksliniuose straipsniuose aptariama SiHa gimdos kaklelio plokščialąstelinio karcinomo ląstelių linija.
Šiame leidinyje „OncoTargets and Therapy“ (2019 m.) buvo iškelta hipotezė, kad natūralus junginys aloe-emodinas SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelėse sukelia su HPV E6/E7 ir gliukozės metabolizmu susijusius apoptozinius efektus.
Šis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Future Journal of Pharmaceutical Sciences“ 2022 m. Šiame tyrime buvo tiriamas Excoecaria agallocha (L.) augalo lapų ekstrakto priešvėžinis poveikis SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių linijoje.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Journal of Sol-Gel Science and Technology“ (2022 m.), buvo iškelta hipotezė, kad 1,10-fenantrolino molekulė, susijungusi su cinko sulfato nanodalelėmis, SiHa ląstelėse sukelia reikšmingą antiproliferacinį poveikį.
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Oncology Reports“ 2019 m. Tyrimas atskleidė, kad natūralus produktas astragalozidas IV slopina SiHa ląstelių migraciją ir invaziją, moduliuodamas TGF-β1 tarpininkaujamus PI3K ir MAPK signalinius kelius.
Šis tyrimas, paskelbtas žurnale „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020 m.), atskleidė, kad IFI16 (interferono-gama indukuojamas baltymas 16) reguliuoja PD-L1 geną, aktyvuodamas STING-TBK1-NF-kB signalinį kelią, taip skatindamas SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių augimą.
Ištekliai, skirti „SiHa“ ląstelių linijai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Čia pateikiami keli internetiniai ištekliai, susiję su SiHa ląstelėmis.
- SiHa ląstelių transfekcija: šiame moksliniame straipsnyje pateikiamas SiHa gimdos kaklelio vėžio ląstelių kultivavimo ir SiHa ląstelių transfekcijos protokolas.
Šioje nuorodoje pateikiama informacija apie SiHa ląstelių kultūrą.
- SiHa ląstelių linija: šioje svetainėje pateikiama daug vertingų duomenų apie SiHa ląstelių liniją. Tai apima informaciją apie auginimo terpes, kultivavimo sąlygas, SiHa ląstelių subkultivavimo protokolus bei jų proliferacinių ir kriokonservuotų kultūrų tvarkymą.
Dažnai užduodami klausimai apie „SiHa“ gimdos kaklelio karcinomos ląsteles
Literatūra
- Melzer, C., J. von der Ohe ir R. Hass, „Trumpas apžvalga: mezenchiminės stromos / kamieninių ląstelių sąveika su vėžio ląstelėmis suteikia terapinį potencialą“. Stem cells, 2018. 36(7): p. 951–968.
- Ostrowska, K.M. ir kt., „Tyrimas, kaip didelės rizikos žmogaus papilomos virusas veikia gimdos kaklelio vėžio ląstelių biocheminę sudėtį, naudojant vibracinę spektroskopiją“. Analyst, 2010. 135(12): p. 3087–3093.
- Chen, Y. ir kt., Žmogaus gimdos kaklelio vėžio ląstelių augimo slopinimas in vitro ir in vivo, skaldant žmogaus papilomos viruso E6/E7 mRNR naudojant CRISPR/Cas13a sistemą. „Antiviral Research“, 2020. 178: p. 104794.
- Fan, Y. ir kt., SEC61G skatina gimdos kaklelio vėžio proliferaciją, aktyvuodamas MAPK signalizacijos kelią. „Disease Markers“, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A. ir kt., „Vatica diospyroides symington tipo SS vaisių ekstraktų priešvėžinis potencialas ir jų poveikis gimdos kaklelio vėžio ląstelių linijų programinei ląstelių mirčiai“. The Scientific World Journal, 2019. 2019.