Cellule SiHa - Un contributo alla ricerca sul cancro cervicale
Le cellule SiHa sono cellule tumorali del collo dell’utero ampiamente utilizzate nella ricerca biomedica. Sono ottimi ospiti per la trasfezione e, pertanto, sono adatte agli studi sull’espressione genica. Grazie alla loro origine umana e alla loro rilevanza nel contesto del cancro del collo dell’utero, queste cellule vengono impiegate principalmente nella biologia del cancro, nella virologia e negli studi sullo sviluppo di farmaci.
- Terreno di coltura
- Per la crescita ottimale delle cellule SiHa si utilizza il terreno minimo essenziale di Eagle (EMEM) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS), 2 mM di L-glutammina, 2,2 g/L di NaHCO₃ e la soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS). Il terreno di coltura viene sostituito da 2 a 3 volte alla settimana.
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio delle cellule SiHa è di circa 17 ore.
- Tipo di crescita
- SiHa è una linea cellulare aderente.
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina SiHa
Caratteristiche generali e origine delle cellule SiHa
Comprendere l’origine e le caratteristiche generali di una linea cellulare è fondamentale, poiché influisce sul suo utilizzo nella vostra ricerca. In questa sezione dell’articolo scoprirete l’origine della linea cellulare SiHa, le sue caratteristiche distintive e molto altro ancora: Che cos’è la linea cellulare tumorale SiHa? Cosa sono le cellule SiHa HPV? Qual è l’origine della linea cellulare SiHa? Qual è la morfologia delle cellule SiHa?
- SiHa, la linea cellulare di carcinoma cervicale, è stata derivata da frammenti di una biopsia uterina primaria di una donna asiatica (55 anni) affetta da carcinoma a cellule squamose [1].
- La linea cellulare SiHa presenta un cariotipo ipertriploide. La maggior parte delle cellule ha un numero medio di cromosomi compreso tra 69 e 72. Tuttavia, circa il 24% delle cellule possiede un numero modale di cromosomi pari a 71.
- Le cellule SiHa sono positive al papillomavirus umano di tipo 16. Presentano un’integrazione di circa 1-2 copie del genoma dell’HPV per cellula [2].
- Queste cellule di carcinoma cervicale presentano una morfologia epiteliale.
Linea cellulare SiHa: informazioni sulla coltura
Mantenere una coltura di linea cellulare non è facile finché non si conoscono tutti i punti chiave per la sua coltura. È necessario sapere: qual è il tempo di raddoppio delle cellule SiHa? Qual è il terreno di coltura delle cellule SiHa? Come si coltiva la linea cellulare SiHa?
Punti chiave per la coltura delle cellule SiHa
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio delle cellule SiHa è di circa 17 ore.
Aderenzi o in sospensione:
La SiHa è una linea cellulare aderente.
Rapporto di subcoltura:
Il rapporto di subcoltura per le cellule SiHa è compreso tra 1:2 e 1:4. Per il passaggio, le cellule aderenti vengono risciacquate con PBS 1x. Si aggiunge la soluzione di Accutase e le cellule vengono incubate per 8-10 minuti a temperatura ambiente. Successivamente, si aggiunge il terreno di coltura e le cellule vengono centrifugate. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca per la coltura.
Terreno di crescita:
Per la crescita ottimale delle cellule SiHa si utilizza il terreno minimo essenziale di Eagle (EMEM) contenente 10% di FBS, 2 mM di L-glutammina, 2,2 g/L di NaHCO₃ e la soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS). Il terreno di coltura viene sostituito da 2 a 3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita:
Le cellule SiHa vengono mantenute in un incubatore umidificato a 37 °C con un'alimentazione di CO₂ al 5%.
Conservazione:
Le fiale congelate della linea cellulare SiHa del cancro cervicale vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore elettrico o, per periodi più lunghi, nella fase vapore dell’azoto liquido.
Processo di congelamento e mezzo:
Per la congelazione delle cellule SiHa si utilizza il mezzo di congelamento CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate utilizzando un metodo di congelamento lento che consente un abbassamento della temperatura di soli 1 °C al minuto, al fine di preservarne la vitalità.
Processo di scongelamento:
Le cellule congelate vengono mantenute per 40-60 secondi in un bagno d’acqua a 37 °C fino a quando non rimane solo un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, viene aggiunto un terreno di coltura fresco e le cellule vengono centrifugate per rimuovere i componenti del mezzo di congelamento. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono trasferite in una fiasca di coltura per la crescita.
Livello di biosicurezza:
Per la manipolazione e la conservazione delle colture cellulari SiHa è necessario un laboratorio di livello di biosicurezza 1.
Vantaggi e svantaggi della linea cellulare SiHa
Come altre linee cellulari di carcinoma umano, anche la SiHa presenta alcune caratteristiche distintive associate a determinati vantaggi e svantaggi. Di seguito ne abbiamo illustrati alcuni tra i più significativi.
Vantaggi della linea cellulare SiHa per il cancro cervicale
- Modello di cancro cervicale
- Derivata dal carcinoma a cellule squamose della cervice uterina.
- Utilizzata per studiare i meccanismi, la crescita e lo sviluppo del cancro cervicale.
- Esprime i geni p53+ e pRB+, correlati alla riparazione del DNA, alla regolazione del ciclo cellulare e alla soppressione tumorale.
- Potenziale tumorigenico
- Le cellule SiHa sono tumorigeniche e possono indurre tumori epidermoidi di grado III scarsamente differenziati nei topi nudi.
- Utilizzate per la ricerca sul cancro in vivo e per testare trattamenti antitumorali.
Svantaggi delle cellule SiHa
- Tasso di proliferazione
- Le cellule SiHa proliferano rapidamente, causando una crescita eccessiva.
- Richiedono frequenti passaggi, aumentando il rischio di instabilità genetica, che può influire sul comportamento cellulare nel tempo.
Applicazioni di ricerca delle cellule SiHa
La linea cellulare SiHa è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro cervicale. Di seguito vengono illustrate alcune applicazioni specifiche di questa linea cellulare.
- Studi relativi al papillomavirus umano (HPV): le cellule SiHa sono positive all’HPV 16 e rappresentano quindi modelli preziosi per lo studio dell’infezione da papillomavirus umano, dei suoi meccanismi molecolari e del suo ruolo nello sviluppo e nella progressione del cancro cervicale. I ricercatori utilizzano queste cellule anche per studiare la replicazione e l’integrazione virale, nonché il loro impatto sui processi delle cellule ospiti. Uno studio condotto nel 2020 ha utilizzato la linea cellulare SiHa per esaminare il ruolo delle oncoproteine E6/E7 dell’HPV nello sviluppo del cancro cervicale, intervenendo su di esse con la tecnologia CRISPR. I risultati hanno rivelato che il knockdown dei geni E6/E7 ha causato l’inibizione della crescita delle cellule SiHa e l’apoptosi. Pertanto, questi geni virali potrebbero rappresentare bersagli farmacologici cruciali per lo sviluppo di terapie contro il carcinoma cervicale associato all’HPV [3].
- Biologia del cancro: le cellule SiHa costituiscono un modello inestimabile per lo studio della biologia del cancro cervicale, compresi lo sviluppo, la progressione, le metastasi e l’invasività della neoplasia. I ricercatori utilizzano queste cellule per esplorare le mutazioni genetiche e le vie molecolari sottostanti che contribuiscono allo sviluppo e alla crescita del cancro cervicale; ad esempio, uno studio ha utilizzato le cellule SiHa e ha scoperto che la sovraregolazione di SEC61G (subunità gamma del translocone SEC61) favorisce la proliferazione delle cellule del cancro cervicale attraverso l’attivazione della cascata MAPK [4].
- Screening e test farmacologici: la linea cellulare SiHa è ampiamente utilizzata per valutare l’efficacia di potenziali farmaci antitumorali specifici per il carcinoma cervicale associato all’HPV. I ricercatori studiano il potenziale antiproliferativo, apoptotico e antimetastatico dei farmaci utilizzando queste cellule. Ad esempio, uno studio condotto nel 2019 ha esaminato il potenziale citotossico degli estratti del frutto di Vatica diospyroides Symington Tipo SS sulla linea cellulare SiHa del cancro cervicale [5].
Cellule SiHa per la tua ricerca!
Pubblicazioni scientifiche dedicate alle cellule SiHa
Alcune pubblicazioni di ricerca significative e spesso citate hanno come oggetto la linea cellulare SiHa del carcinoma squamoso della cervice uterina.
Questa pubblicazione su *OncoTargets and Therapy* (2019) ha ipotizzato che un composto naturale, l’aloe-emodina, eserciti effetti apoptotici associati all’HPV E6/E7 e al metabolismo del glucosio nelle cellule del carcinoma cervicale SiHa.
Questo articolo è stato pubblicato sul *Future Journal of Pharmaceutical Sciences* nel 2022. Lo studio ha esaminato le attività antitumorali dell’estratto di foglie della pianta *Excoecaria agallocha (L.)* sulla linea cellulare del carcinoma cervicale SiHa.
Questo studio, pubblicato sul *Journal of Sol-Gel Science and Technology* (2022), ha suggerito che la molecola di 1,10-fenantrolina, una volta accoppiata a nanoparticelle di solfato di zinco, eserciti significativi effetti antiproliferativi nelle cellule SiHa.
Questa ricerca è stata pubblicata su Oncology Reports nel 2019. Lo studio ha rivelato che l’astragaloside IV, un prodotto naturale, sopprime la migrazione e l’invasione delle cellule SiHa modulando le vie di segnalazione PI3K e MAPK mediate dal TGF-β1.
Questo studio pubblicato su *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) ha rivelato che IFI16 (proteina 16 inducibile dall’interferone gamma) regola il gene PD-L1 attraverso l’attivazione della via STING-TBK1-NF-kB per favorire la crescita delle cellule tumorali cervicali SiHa.
Risorse per la linea cellulare SiHa: protocolli, video e altro ancora
Ecco alcune risorse online dedicate alle cellule SiHa.
- Trasfezione delle cellule SiHa: questo articolo di ricerca contiene un protocollo per il mantenimento delle cellule SiHa del cancro cervicale e per la loro trasfezione.
Il seguente link contiene informazioni sulla coltura cellulare delle cellule SiHa.
- Linea cellulare SiHa: questo sito web contiene molti dati preziosi sulla linea cellulare SiHa. Tra questi figurano informazioni sui terreni di coltura, sulle condizioni di coltura, sui protocolli per la subcoltura delle cellule SiHa e sulla gestione delle colture proliferative e crioconservate.
Domande frequenti sulle cellule di carcinoma cervicale SiHa
Riferimenti
- Melzer, C., J. von der Ohe e R. Hass, "Concise review: crosstalk of mesenchymal stroma/stem-like cells with cancer cells provides therapeutic potential". Stem cells, 2018. 36(7): pp. 951-968.
- Ostrowska, K.M. et al., Studio dell’influenza del papillomavirus umano ad alto rischio sulla composizione biochimica delle cellule tumorali cervicali mediante spettroscopia vibrazionale. Analyst, 2010. 135(12): pp. 3087-3093.
- Chen, Y., et al., Inibizione della crescita in vitro e in vivo delle cellule tumorali del collo dell’utero umano tramite la scissione degli mRNA E6/E7 del papillomavirus umano mediante il sistema CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: p. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G promuove la proliferazione del carcinoma cervicale attivando la via di segnalazione MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Potenziale antitumorale degli estratti di frutta della Vatica diospyroides tipo Symington SS e loro effetto sulla morte cellulare programmata delle linee cellulari del carcinoma cervicale. The Scientific World Journal, 2019. 2019.