Cellule SK-N-LO
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I prodotti vengono spediti congelati in ghiaccio secco in criotubi. Ogni criotubo contiene in genere 3 × 10 6 cellule per le linee aderenti o 5 × 106 cellule per le linee in sospensione (per ulteriori dettagli, consultare il certificato di analisi del lotto).
Informazioni generali
| Descrizione | La linea cellulare SK-N-LO è una linea cellulare di neuroblastoma umano utilizzata nella ricerca per studiare il neuroblastoma e i meccanismi di apoptosi e le vie di segnalazione del cancro. È anche classificata come linea cellulare di tumore neuroectodermico primitivo (PNET) e porta il gene di fusione EWS-FLI1, comunemente presente nei tumori della famiglia del sarcoma di Ewing (ESFT). Questo gene di fusione deriva da una traslocazione cromosomica e svolge un ruolo chiave nel comportamento oncogenico di queste cellule tumorali. Le cellule SK-N-LO sono particolarmente sensibili ad alcuni inibitori che colpiscono le vie di segnalazione oncogeniche. Ad esempio, l'inibitore GLI GANT61 ha dimostrato di indurre l'apoptosi indipendente dalla caspasi nelle cellule SK-N-LO. GANT61 interrompe la trascrizione mediata da GLI1 e GLI2 nella via di segnalazione Hedgehog (Hh), che è fondamentale per la sopravvivenza e la proliferazione cellulare in questa linea cellulare. Quando vengono trattate con GANT61, le cellule SK-N-LO mostrano cambiamenti morfologici associati all'apoptosi, come la condensazione della cromatina e la frammentazione nucleare. Inoltre, GANT61 riduce l'espressione di proteine come GLI2 e survivin, importanti per la progressione del ciclo cellulare e la sopravvivenza, mentre aumenta l'espressione di p21, un inibitore della chinasi ciclina-dipendente. Inoltre, le cellule SK-N-LO sono state utilizzate per studiare la segnalazione dei recettori oppioidi. Queste cellule sono state modificate per esprimere il recettore μ-opioide, il che le rende un modello prezioso per studiare l'interazione tra l'analgesia indotta dagli oppioidi e le vie di segnalazione intracellulare. Ad esempio, alcuni studi hanno dimostrato che la morfina stimola la fosforilazione di Akt nelle cellule SK-N-LO attraverso la via PI3Kγ, un processo che può essere modulato dalla segnalazione di cAMP. Ciò evidenzia la versatilità delle cellule SK-N-LO nell'esplorare sia la biologia del cancro che la neurofarmacologia. |
|---|---|
| Organismo | Umano |
| Tessuto | Cervello |
| Malattia | Tumore neuroectodermico primitivo |
| Sito metastatico | Midollo osseo |
| Sinonimi | SK-N-L0, SKN-LO, SKNLO |
Caratteristiche
| Età | 10 anni |
|---|---|
| Genere | Uomo |
| Etnia | Caucasico |
| Morfologia | Simile all'epitelio |
| Proprietà di crescita | Aderente in fiasche rivestite di collagene |
Dati normativi
| Citazione | SK-N-LO (numero di catalogo Cytion 300400) |
|---|---|
| Livello di biosicurezza | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosauroAccesso | CVCL_4569 |
Dati biomolecolari
| Cariotipo | Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.00005 |
|---|
Manipolazione
| Terreno di coltura | EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a) |
|---|---|
| Integratori | Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA |
| Reagente di dissociazione | Accutase |
| Sottocoltura | Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco. |
| Rapporto di divisione | Si consiglia un rapporto da 1:6 a 1:12 |
| Densità di semina | Da 3 a 4 x 104 cellule/cm2 |
| Rinnovo del fluido | da 2 a 3 volte alla settimana |
| Prodotto da congelare | Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 50% di terreno basale + 40% di FBS + 10% di DMSO, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crioindotto. |
| Scongelamento e coltura delle cellule |
|
| Atmosfera di incubazione | 37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata. |
| Rivestimento del pallone | Per un attaccamento e una vitalità ottimali dopo lo scongelamento, si consiglia di utilizzare fiasche o piastre rivestite di collagene. |
| Procedura di congelamento | Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato. |
| Condizioni di spedizione | Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato. |
| Condizioni di conservazione | Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido. |
Controllo di qualità / Profilo genetico / HLA
| Sterilità | La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza. Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane. |
|---|---|
| Profilo STR |
Amelogenina: x,x
CSF1PO: 11,12
D13S317: 8,11
D16S539: 12
D5S818: 11,12
D7S820: 11
TH01: 10
TPOX: 8,11
vWA: 14,17
D3S1358: 14,17
D21S11: 27,28
D18S51: 12
Penta E: 7
Penta D: 9,13
D8S1179: 12,15
FGA: 25
|
| Alleli HLA |
A*: '24:02:01, '29:02:01
B*: '18:01:01, '58:01:01
C*: '05:01:01, '07:18:01
DRB1*: '03:01:01, '08:04:01
DQA1*: '04:01:02, '05:01:01
DQB1*: '02:01:01, '04:02:01
DPB1*: '02:01:02, '13:01:01
E: '01:01, '01:03
|
Contratto di trasferimento di materiale
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