661w cellák

A 661W egy egér kúpos fotoreceptorokból származó sejtvonal, amelyet eredetileg egy transzgenikus egér retinális tumorából hoztak létre, amely a humán interfotoreceptor retinoid-kötő fehérje (IRBP) promóter irányítása alatt expresszálja a simian vírus 40 (SV40) nagy T antigént. A vonalat posztnatális retinális explantátumokból állították elő, és halhatatlan kúpos fotoreceptor-elősejteket képvisel. A 661W sejtek adhezív növekedést mutatnak, és standard tenyésztési körülmények között, magzati borjú szérummal kiegészített Dulbecco-féle módosított Eagle-táptalajon tartják őket. Széles körben használják őket kúpos fotoreceptorok in vitro modelljeként, különösen a fény által kiváltott károsodás, az oxidatív stressz, az apoptózis és a retinális degeneratív mechanizmusok tanulmányozásában.

A molekuláris és transzkriptomikus jellemzés megerősíti, hogy a 661W sejtek a kúpos fotoreceptorok markereinek többségét expresszálják, beleértve a kúpos opszinokat és a fototranszdukcióval kapcsolatos géneket. A nagy felbontású képalkotó vizsgálatok kimutatták, hogy ezek a sejtek elsődleges csillókat képeznek, amelyek szerkezeti jellemzői a fotoreceptorok csillóit és külső szegmenseit idézik. Immunokémiai és ultrastrukturális elemzések kimutatták a csillós fehérjék lokalizációját az axonémában, a membránban és az átmeneti zónában, alátámasztva azok hasznosságát a retinális csillós betegségek vizsgálatában. Funkcionális vizsgálatok kimutatták, hogy az intraflagelláris transzport gének, például az Ift88 siRNA-mediált lecsökkentése a csillók elvesztéséhez vezet, igazolva a 661W-t mint kezelhető rendszert a csillós biológia mechanisztikus vizsgálataihoz.

A 661W sejtek rendkívül érzékenyek a fotooxidatív stresszre. A látható fénynek való kitettség apoptotikus sejthalált indukál, amely az NF-κB aktivitás lecsökkenésével és a kaszpáz útvonalak aktiválódásával jár. Az anti-apoptotikus fehérjék, például a Bcl-2 túlzott expressziója ellenállást biztosít a fény által indukált apoptózisnak, fenntartva az NF-κB nukleáris aktivitását és javítva a sejtek túlélését. Ezek a tulajdonságok a 661W-t robusztus modellé teszik a fotoreceptorok degenerációjának alapjául szolgáló molekuláris útvonalak elemzéséhez. Fontos megjegyezni, hogy a 661W vonalat történelmi sejtvonal-téves azonosítási eseményekkel is összefüggésbe hozták, beleértve a RGC-5 vonallal való keresztszennyeződést, ami aláhúzza a szigorú hitelesítés szükségességét ennek a modellnek a használata során. Összességében a 661W jól jellemzett egér kúpos fotoreceptor platformot biztosít a retinális degeneráció, az oxidatív stresszreakciók, a csillós funkció és a kúpos sejtek túlélését célzó terápiás beavatkozások tanulmányozásához.