קו התאים A375 – מדריך למחקר בתחום המלנומה

A375 הוא קו תאים של מלנומה אנושית הנמצא בשימוש נרחב במחקר טוקסיקולוגיה ואימונו-אונקולוגיה. חוקרים משתמשים בקו תאים זה כדי לחקור את הביולוגיה של הסרטן ואת מסלולי האיתות, לבדוק או לסנן חומרים פוטנציאליים נגד סרטן, ולפתח טיפולים חדשים ויעילים.

מקור ומאפיינים כלליים של תאי A375

היכרות עם מקורו ומאפייניו הכלליים של קו תאים יכולה לסייע לכם בתכנון השימוש בו במחקר. חלק זה של המאמר יסקור את מקורו ותכונותיו של קו התאים A375. לדוגמה, מהו קו התאים A375? מהן תכונותיו של קו התאים A375? מהיכן מגיעים תאי A375? מהו המורפולוגיה של תאי מלנומה A375? מהו גודל תאי A375?

• קו התאים A375 של סרטן העור מקורו בתרבית שתל של גידול מוצק של אישה בת 54 עם מלנומה ממאירה [1].
• לתאי A375 יש מורפולוגיה דמוית אפיתל.
• גודל תאי A375 קטן יחסית בהשוואה לקווי תאים אחרים. קוטרם הוא כ-12 מיקרומטר.
• תאי המלנומה A375 הם היפוטריפלואידים. מספר הכרומוזומים האופייני לשורת תאים זו הוא 62. בדרך כלל, לכל תא יש תשעה כרומוזומי סמן ועותק אחד של כרומוזומי N2, N6 ו-N22 תקינים.

תאי A375: מידע על תרבית תאים

תרבויות תאי A375 קלות לתחזוקה. אין להן דרישות קפדניות לגידול בתרבית. סעיף זה יסייע לכם ללמוד את המידע הדרוש על גידול בתרבית. כגון: מהו זמן הכפלה של A375? מהו המדיום של קו התאים A375? מהי צפיפות הזריעה של A375? האם תאי מלנומה A375 הם תאים דבקים?

נקודות מרכזיות לגידול תאי A375

זמן הכפלה של האוכלוסייה:

זמן הכפלת תאי A375 הוא 20 שעות.

דבקים או בתמיסה:

A375 הוא קו תאים של מלנומה אנושית הדבקה.

צפיפות זריעה:

צפיפות תאים של 1 x 10⁴ תאים/סמ"^ר היא האידיאלית לתרבויות תאים A375. תאים דבקים נשטפים עם תמיסת מלח פוספט (PBS) 1x ומוחבאים עם תמיסת מעבר (Accutase). לאחר מכן, התאים הוספו למדיום תרבית ועברו צנטריפוגה. התאים שנקצרו הושעו מחדש במדיום תרבית והועברו לבקבוקים חדשים לצורך גידול.

מדיום גידול:

DMEM מומלץ כמדיום אידיאלי ל-A375 כאשר הוא מועשר ב-10% סרום עגלי (FBS), 4.5 גרם/ליטר גלוקוז, 1.5 גרם/ליטר NaHCO3, 4 מ"מ L-גלוטמין ו-1.0 מ"מ פירובט נתרן. יש לחדש את מדיום ה-A375 2-3 ימים בשבוע.

תנאי גידול:

תאי מלנומה A375 מגודלים באינקובטור לח (37°C) עם אספקת CO2 של 5%.

אחסון:

יש לשמור תאי A375 קפואים בטמפרטורה הנמוכה מ-150°C בשלב האדי של חנקן נוזלי או במקפיא חשמלי.

תהליך הקפאה ומדיום:

מדיום CM-1 או CM-ACF משמשים להקפאת קו התאים A375. נבחר תהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה הדרגתית של 1°C בטמפרטורה כדי להגן על חיוניות התאים.

תהליך ההפשרה:

בקבוקון תאי המלנומה A375 הקפואים מוערבל במהירות באמבט מים במשך 40 עד 60 שניות, עד שנותר רק גוש קרח קטן. לתאים מוסיפים מדיום טרי ומרכזים אותם כדי להסיר את מרכיבי המדיום הקפוא. משקע התאים שהתקבל הושעה שוב ונמזג לבקבוקים חדשים.

רמת בטיחות ביולוגית:

תרבויות A375 מטופלות ונשמרות בסביבת מעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 1.

יישומים מחקריים של קו התאים A375

לקו התאים A375 יש יישומים מחקריים נרחבים במחקר הסרטן. להלן כמה מהתחומים הנפוצים שבהם נעשה שימוש בתאי A375.

• מחקר הסרטן: לתאי A375 יש יישומים נרחבים במחקר המלנומה. חוקרים השתמשו בתאים אלה כדי לחקור את הביולוגיה של סרטן העור, את התהליכים ואת מנגנוני איתות התאים הבסיסיים, כולל התרבות תאים, נדידה וחדירה. זה עשוי גם לעזור לחוקרים לזהות מטרות טיפוליות מולקולריות חדשות. מחקר שנערך על ידי Lin Zhu ועמיתיו בשנת 2019 השתמש בתאי מלנומה A375 אגרסיביים ביותר, ומצא את תפקידו של microRNA-3662 בצמיחה ובפלישה של תאי מלנומה A375. ממצאי המחקר קובעים כי microRNA-3662 מכוון לגן ZEB1 ומווסת את צמיחת תאי המלנומה במבחנה ובחיות מעבדה במודל הגידול A375 [2]. באופן דומה, מחקר שנערך בשנת 2018 מצא כי מסלולי PI3K/AKT ו-MAPK/ERK מעורבים בשגשוג ובגרורות של קו התאים A375 [3].
• גילוי ובדיקת תרופות: קו התאים A375 הוא מודל גידול שימושי במבחנה לבדיקה וסינון של חומרים פוטנציאליים נגד סרטן. חוקרים מעריכים את הרעילות והיעילות של תרופות כימותרפיות חדשות, תרכובות וטיפולים אחרים באמצעות תאי מלנומה A375 אלה. לדוגמה, מחקר בחן את התכונות האנטי-סרטניות של מיקרו-וננו-ווסיקולות שמקורן באשכולית על תאי סרטן מלנומה אנושיים מסוג A375. התוצאות גילו כי מיקרו-וננו-ווסיקולות גורמות לעצירת מחזור התא ואפופטוזיס ומעכבות את ביטוי הגנים בהתפשטות, נדידה וחדירה של תאים [4].

תאי A375: פרסומים

להלן מספר פרסומים מחקריים משמעותיים העוסקים בתאי A375.

ויטמין D ואנלוגים בעלי רמת סידן נמוכה שלו מווסתים את התכונות האנטי-סרטניות של ציספלטין ודקרבזין בקו התאים A375 של מלנומה אנושית

מחקר זה פורסם ב-Journal of Oncology בשנת 2019. המחקר הציע כי טיפול משולב בויטמין D ואנלוגים משפר את הפעילות האנטי-סרטנית של ציספלטין ודקרבזין בתאי מלנומה A375.

הערכה במבחנה של ההשפעות האנטי-מלנומטיות (קו תאים A375) של תמציות ג'ל ועלים שלמים ממספר זני אלוורה נבחרים

מחקר זה פורסם ב-Journal of Herbal Medicine בשנת 2022. מחקר זה בחן את ההשפעות האנטי-מלנומטיות של ג'ל אלוורה בתאי מלנומה A375.

חבר משפחת פרמיטין 2 מקדם את התקדמות המלנומה על ידי שיפור קישור ה-p-α-Pix ל-Rac1 כדי להפעיל את מסלול ה-MAPK

מחקר זה, שפורסם ב-Oncogene (2021), הציע כי חבר משפחת ה-Fermitin 2 (FERMT2 או kindlin-2) מעודד התקדמות של מלנומה באמצעות הפעלת MAPK על ידי קישור עם p-α-Pix ו-Rac1.

FARP1 מסייע לשגשוג תאים באמצעות ויסות מסלול האיתות של MAPK במלנומה עורית

מחקר זה, שפורסם בכתב העת The American Journal of Dermatopathology (2019), הציע כי FARP1 עשוי להקל על התפתחות והתקדמות של מלנומה עורית. לפיכך, הוא עשוי להוות יעד טיפולי שימושי.

פוטנציאל ציטוטוקסי ואפופטוטי של תמציות Phyllodium elegans על קווי תאים סרטניים אנושיים

מאמר מחקר זה פורסם ב-Bioengineered (2019). מחקר זה בחן את הפעילות הציטוטוקסית והאפופטוטית של תמצית הצמח Phyllodium elegans על קווי תאים סרטניים אנושיים, כולל A375.

משאבים עבור קו התאים A375: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן מספר משאבים מקוונים העוסקים בתאי A375.

• טרנספקציה של תאי A375: מדריך וידאו זה יסייע לכם ללמוד שלב אחר שלב כיצד לבצע טרנספקציה של תאי A375.
• גידול תאים: בסרטון זה יש מידע שימושי מאוד בנוגע לגידול קווי תאים.

פרוטוקולי תרבית התאים עבור תאי A375 מפורטים כאן.

• קו תאים A375: קישור זה מכיל מידע שימושי על גידול ותחזוקה של קו תאים A375, כולל מצעי A375 וטיפול בתרבויות A375 קפואות ומתרבות.

ביבליוגרפיה

1. Avram, S., et al., Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 מכוון ל-ZEB1 וממתן את הפלישה של קו התאים A375 של מלנומה אגרסיבית ביותר. Cancer Manag Res, 2019. 11: עמ' 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C מעכב את התרבות התאים והגרורות של מלנומה A375 באמצעות דיכוי מסלולי PI3K/Akt ו-MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: עמ' 35-44.
4. Stanly, C., et al., מיקרו-וננו-ווסיקולות שמקורן באשכולית מציגות פרופילים מטבולומיים מובחנים ופעילות אנטי-סרטנית בקו התאים A375 של מלנומה אנושית. Cells, 2020. 9(12): עמ' 2722.