NCI-H1299-RFP 細胞

USUSD$800.00*

產品以乾冰冷藏，並裝於低溫管中運送。每支低溫管通常含有 3 × 10^⁶ 個細胞（適用於貼壁細胞系）或 5 × 10⁶ 個細胞（適用於懸浮細胞系）（詳情請參閱該批次的分析證書）。

價格不含稅，另加運費

cryovial

產品編號： 300272

安全資料表

產品說明書

說明	經過基因改造、在 DAPK1 基因中嵌入報告基因的 NCI-H1299 RFP 細胞，不僅有助於研究特定基因的活化機制，更能讓我們更全面地了解細胞如何整體性地對表觀遺傳藥物作出反應。透過一種稱為「基因表達帽分析」（CAGE）的技術，研究人員得以詳細闡明，當細胞接受 DNMTi（DAC）、HDACi（SAHA 或 SB939）或其組合治療時，全基因組範圍內轉錄起始位點的變化。此方法不僅揭示了預期中的 DAPK1 基因重新活化，更發現了新的轉錄起始位點——稱為「治療誘導的非註釋轉錄起始位點」（TINATs）——特別是在藥物治療下。這些新的起始位點通常位於基因組中通常不產生蛋白質的區域，並會產生可能編碼蛋白質的新 RNA 分子。進一步分析顯示，這些新的 RNA 分子有時會與現有的 RNA 分子融合，形成所謂的 TINAT-外顯子融合轉錄本。根據這些轉錄本的剪接方式不同，它們可能轉譯成新型的非典型蛋白質。此過程已透過實驗室技術獲得證實，這些技術顯示這些轉錄本確實能導致新蛋白質形式的產生。這些蛋白質可能在細胞內產生異常相互作用，或被免疫系統識別為外來物質，從而為癌症治療提供潛在的新靶點。這些 TINAT 的活化涉及 DNA 甲基化與組蛋白修飾的複雜變化，顯示出在藥物治療下，這些表觀遺傳因子之間存在著複雜的相互作用。特別是，DAC 與 SB939 的聯合使用顯示出更顯著的效果，其提升這些新型轉錄本的表現程度，遠超過單獨使用任一藥物時的效果。理解這些相互作用及其結果，有助於釐清表觀遺傳療法如何改變細胞行為，並為利用這些複雜分子變化開發新的癌症治療方法開闢了可能性。
生物體	人類
組織	肺
疾病	大細胞癌
轉移部位	原發性腫瘤部位（肺）
應用	表觀遺傳療法研究；DAPK1 基因重新活化；DNMTi 與 HDACi 藥物反應研究；治療誘導的非註釋轉錄起始位點（TINATs）；CAGE 轉錄組學；融合轉錄本分析；來自隱性啟動子的非典型蛋白質合成；表觀遺傳藥物聯合用藥篩選

形態學	上皮樣
細胞類型	上皮細胞
生長特性	依附者

引用	NCI-H1299-EGFP，具 G418 抗性及沉默的報告基因（DKFZ # P-1045）（Cytion 型號 300272）
生物安全等級	1
NCBI_TaxID	9606
Cellosaurus 編號	CVCL_XB25
轉基因狀態	GMO-S1：此 NCI-H1299 衍生物（DKFZ #P-1045）在 DAPK1 基因座中含有一個被穩定沉默的 EGFP 報告基因，可進行表觀遺傳再活化檢測。含有 G418 抗性 cassete。此分類僅適用於德國境內，其他地區可能有所不同。

培養基	RPMI 1640，含 2.0 mM 穩定谷氨醯胺，含 2.0 g/L NaHCO₃（Cytion 產品編號 820700a）
營養補充品	在培養基中加入 10% 的胎牛血清（FBS）
解離試劑	Accutase
倍增時間	約 24 至 36 小時
傳代培養	從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
拆股比例	1 至 5
播種密度	1 至 3 × 10⁴ 個細胞/cm²
流體更新	每週 2 至 3 次
冷凍培養基	作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
細胞解凍與培養	請確認小瓶在送達時仍處於深度冷凍狀態，因為細胞是透過乾冰運送，以確保在運輸過程中維持最佳溫度。收到後，請立即將冷凍管儲存於低於 -150°C 的溫度下，以確保細胞完整性；若需立即進行培養，則請直接進行步驟 3。若需立即進行培養，請將試管浸入含有清潔水及抗菌劑的 37°C 水浴中，並輕輕搖動 40-60 秒，直至僅剩一小塊冰塊，以迅速解凍試管。後續所有步驟均須在無菌條件下於通風櫥內進行，開啟冷凍試管前請先以 70% 乙醇消毒。小心地打開已消毒的試管，將細胞懸浮液轉移至含有 8 毫升室溫培養基的 15 毫升離心管中，並輕輕混合。將混合物以 300 x g 離心 3 分鐘以分離細胞，並小心地棄去含有殘留冷凍培養基的上清液。將細胞沉澱輕輕懸浮於 10 毫升的新鮮培養基中。若為貼壁細胞，將懸浮液分裝至兩個 T25 培養瓶中；若為懸浮培養，則將所有培養基轉移至一個 T25 培養瓶中，以促進有效的細胞相互作用與生長。請遵循既定的傳代培養程序，以持續培養和維護細胞系，確保實驗結果的可靠性。
培養環境	37°C，5% CO_₂，加濕環境。
運送條款	冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
儲存條件	若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

不孕症	透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

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一般資訊

特徵

監管數據

生物分子資料

處理方式

品質控制與分子分析