HUH-1 Cells

Mediul de congelare CM-1 de la Cytion este un mediu de crioconservare de ultimă generație, conceput pentru a asigura cel mai înalt nivel de viabilitate și funcționalitate celulară după dezghețare. Acest mediu versatil este potrivit pentru un spectru larg de tipuri de celule, inclusiv celule umane și animale, ceea ce îl face un instrument esențial pentru diverse aplicații de cercetare. Formulat cu o combinație meticulos echilibrată de crioprotectanți și nutrienți esențiali, Freeze Medium CM-1 minimizează formarea cristalelor de gheață și stresul celular în timpul procesului de congelare, păstrând astfel integritatea celulară.
Caracteristicile principale ale Freeze Medium CM-1 includ:

Compatibilitate largă: Eficient pentru o gamă largă de tipuri de celule, inclusiv celule primare, celule stem și linii celulare stabilite.
Viabilitate ridicată: Optimizat pentru a maximiza recuperarea și viabilitatea celulelor după dezghețare, asigurând rezultate experimentale fiabile.
Gata de utilizare: Preparate și sterilizate convenabil pentru aplicare imediată, reducând timpul de preparare și riscul de contaminare.
Stabilitate îmbunătățită: Menține performanța constantă în condiții standard de crioconservare, asigurând rezultate reproductibile.
Durată lungă de valabilitate: CM-1 este un mediu de crioconservare care conține ser, gata de utilizare, care poate fi păstrat în frigider timp de până la un an.


Utilizarea CM-1 pentru congelarea celulelor

Pentru a utiliza CM-1 pentru congelarea celulelor aderente și în suspensie, urmați acești pași

Pentru celulele aderente, spălați-le și disociați-le de substratul de cultură. Pentru celulele în suspensie, treceți direct la pasul următor.
Numărați celulele pentru a vă asigura că sunt la concentrația corespunzătoare.
Centrifugați celulele pentru a le granula, apoi resuspendați-le în mediul de congelare CM-1.
Transferați celulele resuspendate în crioale.
Utilizați o metodă de congelare lentă înainte de a transfera celulele pentru depozitare pe termen lung





Metodă
Descriere
Etape





❄️
Înghețarea manuală

O metodă pas cu pas care implică reducerea treptată a temperaturii pentru a asigura viabilitatea celulelor

1️⃣ Puneți celulele în mediu de congelare într-un congelator la 4°C timp de 40 de minute.
2️⃣ Se transferă la un congelator la -80°C timp de 24 de ore.
3️⃣ Depozitați celulele în azot lichid pentru conservare pe termen lung



❄️
Utilizarea Mr. Frosty

Un dispozitiv convenabil care permite ratele de congelare controlate fără energie electrică

1️⃣ Pregătiți celulele în crioale cu mediu de congelare.
2️⃣ Așezați criovialele în recipientul Mr. Frosty.
3️⃣ Păstrați la -80°C timp de 24 de ore înainte de a transfera în azot lichid



❄️
Congelator cu rată controlată

Un congelator de înaltă precizie de la Thermo Fisher sau de la alți producători conceput pentru reducerea controlată a temperaturii

1️⃣ Programați dispozitivul pentru a reduce treptat temperatura.
2️⃣ Introduceți celulele pregătite în congelator.
3️⃣ După ciclul de congelare, transferați celulele în azot lichid









Depozitați criovialele la temperaturi sub -130°C sau în azot lichid pentru conservare pe termen lung.


Ingrediente

Conține FBS, DMSO, glucoză, săruri
Capacitate de tamponare: pH = 7,2 până la 7,6


Mediul de congelare CM-1 de la Cytion oferă o soluție fiabilă pentru crioconservare, asigurând o viabilitate celulară ridicată și funcționalitate post-dezgheț pentru o gamă largă de aplicații de cercetare.

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) este un mediu bazal foarte versatil și utilizat pe scară largă, conceput pentru a susține creșterea unei game variate de celule de mamifere în cercetarea biologică. Este un mediu ideal pentru cultivarea fibroblastelor primare, a neuronilor, a celulelor gliale, a HUVEC-urilor, a celulelor musculare netede, precum și a liniilor celulare populare precum HeLa, 293, Cos-7 și PC-12.
Ceea ce diferențiază DMEM de alte medii este compoziția sa unică. Acesta conține o creștere impresionantă de patru ori a concentrației de aminoacizi și vitamine în comparație cu Eagle's Minimal Essential Medium original. Dezvoltat inițial cu un nivel scăzut de glucoză (1 g/L) și piruvat de sodiu, DMEM este frecvent utilizat cu niveluri mai ridicate de glucoză, fie cu piruvat de sodiu, fie fără acesta. În special, DMEM nu conține proteine, lipide sau factori de creștere, fiind necesară suplimentarea. Pentru a obține o creștere optimă, o abordare comună este suplimentarea DMEM cu 10% ser fetal bovin (FBS). În plus, DMEM utilizează un sistem tampon de bicarbonat de sodiu, care necesită un mediu cu 5-10% CO2 pentru a menține un pH fiziologic.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) este foarte apreciat printre mediile definite pentru cultura de celule și țesuturi, răspunzând nevoilor de creștere ale diferitelor fenotipuri de celule aderente. Acesta depășește mediul Eagle original, dezvoltat în anii 1950 pentru cultivarea celulelor de pui, prin formularea suplimentară îmbunătățită cunoscută sub numele de modificarea Dulbecco. Această modificare mărește semnificativ conținutul de aminoacizi și vitamine selecționate, de până la patru ori față de mediul original.
În domeniul culturii de celule, DMEM joacă un rol vital ca mediu de creștere pentru diferite tipuri de celule, inclusiv celule primare, celule stem și celule transformate. De asemenea, cercetătorii utilizează versiunea modificată a DMEM pentru o gamă largă de aplicații de cercetare, cum ar fi descoperirea de medicamente, ingineria țesuturilor și studiul căilor de semnalizare celulară.

Controlul calității

Steril-filtrat


Depozitare și termen de valabilitate

A se păstra la +2°C până la +8°C, ferit de lumină.
Odată deschis, depozitați la 4°C și utilizați în termen de 6-8 săptămâni.


Condiții de transport

Temperatură ambiantă


Întreținere

Păstrați la frigider la +2°C până la +8°C, în întuneric. Evitați înghețarea și încălzirea frecventă la +37°C, deoarece aceasta reduce calitatea produsului.
Nu încălziți mediul peste 37°C și nu utilizați surse de căldură necontrolate, cum ar fi aparatele cu microunde.
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, se îndepărtează cantitatea necesară și se încălzește la temperatura camerei înainte de utilizare.


Compoziție



Categoria
Componente
Concentrație (mg/L)


Aminoacizi
Glicină
30.00



L-arginină HCl
84.00



L-cistină 2 HCl
62.57



L-Glutamină
584.00



L-histidină HClH2O
42.00



L-Isoleucină
105.00



L-Leucină
105.00



L-lizină HCl
146.00



L-Metionină
30.00



L-fenilalanină
66.00



L-serină
42.00



L-Treonină
95.00



L-triptofan
16.00



L-tirozină 2 Na 2H2O
103.79



L-Valină
94.00


Vitamine
Clorură de colină
4.00



Pantotenat D-calcic
4.00



Acid folic
4.00



mio-Inositol
7.20



Nicotinamidă
4.00



Piridoxal HCl
4.00



Riboflavină
0.40



Tiamină HCl
4.00


Săruri anorganice
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Alte componente
D-glucoză
4500.00



Fenol roșu sare de sodiu
15.90



Piruvat de sodiu
110.00

Soluție de detașare celulară Accutase cu EDTA și roșu fenol – 100 ml

Accutase este o soluție de detașare celulară gata de utilizare, filtrată steril, concepută ca o alternativă delicată la tripsină/EDTA pentru disocierea celulelor mamifere aderente de pe recipientele standard din plastic pentru culturi tisulare și de pe suprafețele acoperite cu strat de aderență. Aceasta combină activitatea enzimelor proteolitice și colagenolitice într-o soluție salină echilibrată pentru a asigura o disociere eficientă, dar controlată, conservând proteinele de la suprafața celulară și favorizând o viabilitate ridicată după pasare și o reatașare rapidă.

Formula Accutase se bazează pe soluția salină tamponată cu fosfat Dulbecco (DPBS) cu EDTA și roșu de fenol ca indicator vizual al pH-ului. Enzimele sunt de origine non-mamiferă și non-bacteriană, ceea ce face ca Accutase să fie deosebit de potrivit pentru cercetarea celulelor stem, fluxurile de lucru pentru vaccinuri și orice aplicație în care contaminanții de origine animală sau microbiană trebuie minimizați. Soluția se autoinhibă la 37 °C, astfel încât nu este necesar niciun reactiv de neutralizare sau mediu conținând ser după detașare – celulele pot fi transferate direct într-un mediu proaspăt.

Caracteristici cheie

Lichid 1x filtrat steril, gata de utilizare – nu este necesară diluarea sau reconstituirea
Activitate enzimatică proteolitică și colagenolitică combinată pentru o disociere delicată
Fiecare lot este standardizat la o activitate de disociere definită pentru a asigura consistența de la lot la lot
Enzime de origine non-mamiferă și non-bacteriană
Se autoinhibă la 37 °C – nu este necesară o soluție de neutralizare
Formulat în PBS Dulbecco cu EDTA
Roșu de fenol inclus ca indicator vizual al pH-ului
pH 6,8 – 7,8


Aplicații tipice
Accutase disociază ușor o gamă largă de tipuri de celule aderente și sensibile, inclusiv celule stem embrionare umane (hESC), celule stem pluripotente induse umane (iPSC), celule stem neuronale, neuroni primari și linii aderente cultivate în mod obișnuit, precum HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 și A549. Cazuri tipice de utilizare includ:

Subcultivarea și pasarea de rutină a celulelor mamifere aderente
Disocierea delicată a celulelor individuale din hESC, iPSC și alte linii sensibile
Pregătirea probelor pentru citometrie în flux și analiza FACS
Analiza markerilor de suprafață celulară în cazul în care integritatea epitopului este importantă
Testele de migrare, proliferare și apoptoză celulară
Teste de repaus prin privare de ser și studii de transfecție cu oncogene
Teste de migrare a celulelor tumorale și a celulelor creastei neurale
Creșterea producției în fluxurile de lucru ale bioreactorului

Pentru lucrările de rutină, aplicați aproximativ 10 ml de Accutase pe 75 cm2 de suprafață de cultură și incubați timp de 5–10 minute la temperatura camerei. Timpul optim de incubare trebuie determinat pentru fiecare linie celulară și nu trebuie să depășească o oră. Înainte de adăugare, clătiți stratul celular cu o soluție salină fără Ca2+/Mg2+, cum ar fi DPBS fără calciu și magneziu, pentru a îndepărta serul rezidual și cationii bivalenți.

Manipulare și depozitare
Depozitați flaconul nedeschis la -15 °C sau mai jos. Decongelați fie la temperatura camerei, fie peste noapte la +2 °C până la +8 °C. Nu decongelați Accutase într-o baie de apă la 37 °C, deoarece temperaturile ridicate reduc activitatea enzimatică. După decongelare, soluția poate fi păstrată până la 2 luni la +2 °C până la +8 °C; nu depozitați la temperatura camerei. Nu preîncălziți reactivul la 37 °C înainte de aplicare – adăugați-l direct la celulele spălate la temperatura camerei. Pentru o durată de valabilitate îndelungată, se recomandă alicotarea de unică folosință pentru a evita ciclurile repetate de decongelare. Lucrați întotdeauna în condiții aseptice.

Calitate
Fabricat în conformitate cu standarde stricte de calitate. Fiecare lot de Accutase este filtrat steril și testat pentru sterilitate, pH, aspect și activitate de disociere, pentru a asigura performanțe consistente și reproductibile de la un lot la altul.

Specificații



Specificații
Detalii



Tipul produsuluiReactiv de detașare/disociere celulară
FormatLichid filtrat steril, gata de utilizare
Volum100 ml
Concentrație de lucru1x (gata de utilizare)
Activitate enzimaticăProteolitică și colagenolitică combinată
Originea enzimelorNon-mamiferă și non-bacteriană
Sistem tamponPBS Dulbecco cu EDTA
Indicator de pHRoșu de fenol
Interval de pH6,8 – 7,8
AspectSoluție limpede, de culoare roșu pal până la portocaliu
Temperatura de depozitare-15 °C sau mai puțin
Stabilitate după decongelarePână la 2 luni la +2 °C până la +8 °C
Volum recomandat de utilizare~10 ml per 75 cm² suprafață de cultură
Timp tipic de incubare5 – 10 minute la temperatura camerei
Condiții de transportCongelat în gheață carbonică
Utilizare prevăzutăNumai pentru cercetare și producție ulterioară



Formulă (Compoziție pe litru)



Component
Concentrație (mg/L)




Săruri anorganice

Clorură de sodiu (NaCl)8000,00
Hidrogenofosfat disodic (Na2HPO4)1150,00
Clorură de potasiu (KCl)200,00
Dihidrogenofosfat de potasiu (KH2PO4)200,00

Alte componente

EDTA · 4Na (EDTA tetrasodic)220,00
Roșu de fenol3,00
Amestec enzimatic brevetat (activitate proteolitică și colagenolitică)1x



Accutase este o marcă comercială înregistrată a Innovative Cell Technologies, Inc.

Prezentare generală a produsului
Volum: 100 ml Depozitare: ≤-15°C Sterilitate: Steril-filtrat
Antibiotic/Antimicotic Solution (100x) este un concentrat steril, gata de utilizare, conceput pentru a reduce riscurile de contaminare microbiană în culturile celulare și în aplicațiile de laborator conexe. Această soluție 100x conține o combinație bine stabilită de penicilină, streptomicină și amfotericină B
- care asigură o activitate antimicrobiană cu spectru larg împotriva bacteriilor Gram-pozitive și Gram-negative, drojdiilor și ciupercilor filamentoase. Formularea este adecvată pentru utilizarea în culturi de celule eucariote, medii bacteriene și alte sisteme sensibile la contaminare, sprijinind operațiunile de laborator curate și consecvente.
Aplicație și beneficii Optimizată pentru protocoalele de cercetare de rutină, această soluție este utilizată pe scară largă pentru menținerea condițiilor aseptice în fluxurile de lucru din culturile celulare. Aceasta oferă performanțe fiabile în medii sensibile la contaminare, ajutând cercetătorii să reducă riscul de creștere microbiană excesivă fără a compromite sănătatea celulelor sau reproductibilitatea experimentelor. Formularea filtrată steril elimină necesitatea unor etape suplimentare de solubilizare, susținând pregătirea raționalizată a mediilor și reducând variabilitatea procedurilor zilnice de laborator.
Utilizare și compatibilitate Pentru a obține concentrații de lucru standard, diluați soluția 1:100 în mediul de cultură complet. Produsul este compatibil cu o gamă largă de linii celulare de mamifere și medii bazale. Datorită disponibilității constante a stocurilor, cercetătorii beneficiază de o continuitate fiabilă a aprovizionării și de o planificare logistică simplificată. Soluția trebuie depozitată la ≤ -15 °C și protejată de cicluri repetate de îngheț-dezgheț pentru a menține stabilitatea. Numai pentru utilizare în cercetare. A nu se utiliza în proceduri diagnostice sau terapeutice. Nu se utilizează la om sau la animale.

Soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)
Soluția salină tamponată cu fosfat (PBS) este o soluție tampon utilizată pe scară largă în cercetarea biologică și chimică. Aceasta joacă un rol crucial în menținerea echilibrului pH-ului și a osmolarității în timpul diferitelor proceduri experimentale, inclusiv prelucrarea țesuturilor și cultura celulară. Soluția noastră PBS este formulată meticulos cu ingrediente de înaltă puritate pentru a asigura stabilitatea și fiabilitatea în fiecare experiment. Osmolaritatea și concentrațiile de ioni ale soluției noastre PBS le imită îndeaproape pe cele ale corpului uman, făcând-o izotonică și netoxică pentru majoritatea celulelor.

Compoziția soluției noastre PBS
Soluția noastră PBS este un amestec cu pH ajustat de soluții tampon fosfat de calitate ultrapură și soluții saline. La o concentrație de lucru 1X, aceasta conține:

8000 mg/L clorură de sodiu (NaCl)
200 mg/L Clorură de potasiu (KCl)
1150 mg/L Fosfat de sodiu dibazic anhidru (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfat de potasiu monobazic anhidru (KH2PO4)

Această compoziție asigură un pH optim și un echilibru ionic, adecvat pentru o gamă largă de aplicații biologice.

Aplicații ale soluției noastre PBS
Soluția noastră PBS este ideală pentru diverse aplicații în cercetarea biologică. Proprietățile sale izotonice și non-toxice o fac potrivită pentru diluarea substanțelor și clătirea recipientelor pentru celule. Soluțiile PBS care conțin EDTA sunt eficiente pentru desprinderea celulelor atașate și grupate. Cu toate acestea, metalele divalente, cum ar fi zincul, nu trebuie adăugate în PBS, deoarece pot provoca precipitații. În astfel de cazuri, sunt recomandate tampoanele Good. În plus, soluția noastră PBS este o alternativă acceptabilă la mediul de transport viral pentru transportul și depozitarea virușilor ARN, inclusiv SARS-CoV-2.

Controlul calității

Steril-filtrat


Depozitare și termen de valabilitate

A se păstra la +2°C până la +25°C, ferit de lumină.
Odată deschis, depozitați la o temperatură cuprinsă între 2°C și 25°C și utilizați în termen de 24 de luni.


Condiții de transport

Temperatură ambiantă


Întreținere

Păstrați la frigider la +2°C până la +8°C, în întuneric. Evitați înghețarea și încălzirea frecventă la +37°C, deoarece reduce calitatea produsului.
Nu încălziți mediul peste 37°C și nu utilizați surse de căldură necontrolate, cum ar fi aparatele cu microunde.
În cazul în care urmează să se utilizeze doar o parte din mediu, se îndepărtează cantitatea necesară și se încălzește la temperatura camerei înainte de utilizare.

Compoziție



Categoria
Componente
Concentrație (mg/L)


Săruri
Clorură de potasiu
200



Fosfat de potasiu monobazic anhidru
200



Clorură de sodiu
8000



Fosfat de sodiu dibazic anhidru
1150