Cellule KC
Informazioni generali
| Descrizione | KC (Kc167) è una linea cellulare embrionale di Drosophila melanogaster derivata da un embrione femminile allo stadio di chiusura dorsale, registrata su Cellosaurus con il codice CVCL_Z833. La linea è stata originariamente istituita ed è stata ampiamente utilizzata nella biologia cellulare della Drosophila, negli screening genetici e nella genomica funzionale. Le cellule Kc167 sono state immortalizzate con SV40 e crescono in modo semi-aderente, formando una popolazione mista di cellule attaccate e cellule che galleggiano liberamente. Sono tra le linee cellulari di Drosophila meglio caratterizzate e sono pienamente suscettibili al silenziamento genico mediato da RNAi, il che le rende un modello fondamentale per gli screening di RNAi a livello genomico nella biologia degli invertebrati. Le cellule KC trovano applicazione nella biologia cellulare della Drosophila, negli screening a livello genomico basati su RNAi e CRISPR, negli studi sulle vie di trasduzione del segnale (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), nella ricerca sull’immunità innata e negli studi comparativi sulle vie conservate evolutivamente. Il genoma della Drosophila, completamente sequenziato e annotato, combinato con ampie banche dati pubbliche di reagenti per l’RNAi (ad es. DRSC/TRiP), rende le cellule KC particolarmente efficaci per la scoperta genomica funzionale imparziale. A causa dell’immortalizzazione con SV40, si applica la classificazione BSL-2. Le cellule KC vengono coltivate in terreno Schneider per Drosophila integrato con 2 mM di glutammina e 10% di FBS. È fondamentale sottolineare che le linee cellulari di Drosophila vengono coltivate a 25 °C in aria ambiente senza CO₂ (non a 37 °C / 5% di CO₂ come per le cellule dei mammiferi). Le cellule vengono sottoposte a passaggi mediante delicata risospensione e diluizione (crescita semi-aderente). Il terreno viene rinnovato oppure le cellule vengono diluite ogni 2–3 giorni. |
|---|---|
| Organismo | Drosophila melanogaster (mosca della frutta) |
| Tessuto | Embrione |
| Malattia | Normale |
| Sito metastatico | Embrione (fase di chiusura dorsale) |
| Applicazioni | Biologia cellulare della Drosophila; screening RNAi su scala genomica; screening CRISPR; trasduzione del segnale (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); immunità innata; genomica funzionale degli invertebrati |
| Sinonimi | KC, K C |
Caratteristiche
| Età | Fase di chiusura dorsale |
|---|---|
| Genere | Donna |
| Morfologia | Di tipo epiteliale semi-aderente |
| Tipo di cellula | Cellule embrionali |
| Proprietà di crescita | semi-aderente |
Dati normativi
| Citazione | KC (codice catalogo Cytion 300604) |
|---|---|
| Livello di biosicurezza | 2 |
| NCBI_TaxID | 7227 |
| CellosauroAccesso | CVCL_Z833 |
| Stato degli OGM | GMO-S2: Questa linea cellulare di Drosophila contiene una cassetta di immortalizzazione SV40 integrata in modo stabile. È richiesto un livello di contenimento BSL-2. Questa classificazione è valida solo in Germania e potrebbe variare in altri paesi. |
Dati biomolecolari
| Suscettibilità al virus | SV40 immortalato |
|---|
Manipolazione
| Terreno di coltura | Terreno di coltura Schneider per Drosophila + 2 mM di glutammina + 10% di siero fetale bovino (FBS). |
|---|---|
| Integratori | Aggiungere al terreno di coltura 2 mM di glutammina e il 10% di FBS |
| Reagente di dissociazione | Non necessario (semi-aggregato; risospendere delicatamente) |
| Tempo di raddoppio | circa 24-48 ore |
| Sottocoltura | Pipettare delicatamente la coltura per risospendere le cellule semi-aderenti. Trasferire un volume adeguato in una nuova fiasca e aggiungere terreno di Schneider fresco e preriscaldato. Diluire fino a una densità compresa tra 5 × 10⁵ e 1 × 10⁶ cellule/ml. Incubare a 25 °C in aria ambiente senza CO₂. |
| Rapporto di divisione | da 1 a 3 |
| Densità di semina | da 5 × 10⁵ a 1 × 10⁶ cellule/ml |
| Rinnovo del fluido | Ogni 2 o 3 giorni |
| Prodotto da congelare | Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto. |
| Scongelamento e coltura delle cellule |
|
| Atmosfera di incubazione | 25 °C, aria ambiente (non è necessaria la CO₂). |
| Condizioni di spedizione | Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato. |
| Condizioni di conservazione | Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido. |
Controllo qualità e analisi molecolare
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