SiHa-sejtek – Új megvilágításban a méhnyakrák-kutatás
A SiHa sejtek a méhnyakrák sejtjei, amelyeket széles körben használnak az orvostudományi kutatásban. Kiváló transzfekciós gazdasejtek, ezért alkalmasak génkifejeződési vizsgálatokra. Emberi eredetük és a méhnyakrákhoz való kapcsolódásuk miatt ezeket a sejteket főként a rákbiológia, a virológia és a gyógyszerfejlesztés területén alkalmazzák.
- Növekedési tápközeg
- A SiHa-sejtek ideális növekedéséhez 10% FBS-t, 2 mM L-glutamint, 2,2 g/L NaHCO3-t és Earle-féle kiegyensúlyozott sóoldatot (EBSS) tartalmazó Eagle-féle minimális esszenciális táptalajt (EMEM) használnak. A tápközeget hetente 2–3 alkalommal cserélik.
- Duplázódási idő
- A SiHa sejtek duplázódási ideje körülbelül 17 óra.
- Növekedési típus
- A SiHa adhezív sejtvonal.
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Beszerzési forrás
- Cytion — SiHa megrendelése
A SiHa sejtek általános jellemzői és eredete
A sejtvonal eredetének és általános jellemzőinek megértése elengedhetetlen, mivel ez befolyásolja annak felhasználását a kutatás során. Ebben a cikkben a SiHa sejtvonal eredetéről, jellegzetes tulajdonságairól és még sok másról olvashat: Mi a SiHa rákos sejtvonal? Mely HPV-típusokhoz tartoznak a SiHa sejtek? Mi a SiHa sejtvonal eredete? Milyen a SiHa morfológiája?
- A SiHa méhnyakrákos sejtvonal egy laphámsejtes rákban szenvedő ázsiai nő (55 éves) elsődleges méhbiopsziájából származó szövetdarabokból lett előállítva [1].
- A SiHa sejtvonal hipertriploid kariotípust mutat. A sejtek többségének átlagos kromoszómaszáma 69 és 72 között van. A sejtek körülbelül 24%-ának azonban 71 a modális kromoszómaszáma.
- A SiHa-sejtek humán papillomavírus 16-pozitívak. Sejtenként körülbelül 1–2 HPV-genom másolat integrációját mutatják [2].
- Ezek a méhnyakrákos sejtek epiteliális morfológiát mutatnak.
SiHa sejtvonal: Tenyésztési információk
A sejtvonal tenyésztésének fenntartása nem egyszerű, amíg nem ismeri a tenyésztés összes fontos szempontját. Tudnia kell: Mennyi a SiHa sejtvonal duplázódási ideje? Mi a SiHa sejtkultúra táptalaja? Hogyan tenyészthető a SiHa sejtvonal?
A SiHa sejtek tenyésztésének legfontosabb szempontjai
Duplázódási idő:
A SiHa sejtek duplázódási ideje körülbelül 17 óra.
Adherens vagy szuszpenziós:
A SiHa egy adhezív sejtvonal.
Szubkultivációs arány:
A SiHa sejtek szubkultivációs aránya 1:2 és 1:4 között van. A passzáláshoz az adhezív sejteket 1x PBS-sel öblítik le. Accutase oldatot adnak hozzá, és a sejteket 8–10 percig szobahőmérsékleten inkubálják. Ezt követően tenyésztőtáptalajt adunk hozzá, majd a sejteket centrifugáljuk. A sejtpelletet újra szuszpendáljuk, majd a sejteket átöntjük egy új lombikba tenyésztés céljából.
Növekedési tápközeg:
A SiHa sejtek ideális növekedéséhez 10% FBS-t, 2 mM L-glutamint, 2,2 g/l NaHCO3-t és Earle-féle kiegyensúlyozott sóoldatot (EBSS) tartalmazó Eagle-féle minimális esszenciális táptalajt (EMEM) használunk. A tápközeget hetente 2–3 alkalommal cserélik.
Növekedési körülmények:
A SiHa sejteket 37 °C-os, párásított inkubátorban, 5%-os CO₂-ellátással tartjuk.
Tárolás:
A fagyasztott SiHa méhnyakrák-sejtvonalat -150 °C alatti hőmérsékleten, elektromos fagyasztóban vagy hosszabb távon folyékony nitrogén gőzfázisában tárolják.
Fagyasztási eljárás és táptalaj:
A SiHa sejtek fagyasztásához CM-1 vagy CM-ACF fagyasztóközeget használnak. A sejteket lassú fagyasztási módszerrel fagyasztják le, amely percenként csupán 1 °C-os hőmérsékletcsökkenést tesz lehetővé a sejtek életképességének megőrzése érdekében.
Felolvasztási folyamat:
A fagyasztott sejteket 40–60 másodpercig 37 °C-os vízfürdőben tartják, amíg csak egy kis jégdarabka marad. Ezután friss tenyészközegeket adnak hozzá, és a sejteket centrifugálják a fagyasztóközeg-összetevők eltávolítása érdekében. A sejtpelletet újra szuszpendálják, majd a sejteket tenyésztőedénybe helyezik a szaporodáshoz.
Biológiai biztonsági szint:
A SiHa sejtkultúrák kezeléséhez és fenntartásához 1. biológiai biztonsági szintű laboratórium szükséges.
A SiHa sejtvonal előnyei és hátrányai
Más emberi karcinóma sejtvonalakhoz hasonlóan a SiHa is rendelkezik néhány jellegzetes tulajdonsággal, amelyek bizonyos előnyökkel és hátrányokkal járnak. A következőkben néhány jelentősebbet tárgyalunk.
A SiHa méhnyakrák-sejtvonal előnyei
- Méhnyakrák-modell
- A méhnyak laphámsejtes karcinómájából származik.
- A méhnyakrák mechanizmusainak, növekedésének és fejlődésének tanulmányozására használják.
- Kifejezi a p53+ és pRB+ géneket, amelyek a DNS-javításhoz, a sejtciklus szabályozásához és a tumor szuppresszióhoz kapcsolódnak.
- Tumorképző potenciál
- A SiHa sejtek tumorigenikusak, és alacsony differenciáltságú, III. fokozatú epidermoid daganatokat képesek kiváltani meztelen egerekben.
- In vivo rákkutatáshoz és rákellenes kezelések teszteléséhez használják.
A SiHa-sejtek hátrányai
- Szaporodási sebesség
- A SiHa sejtek gyorsan szaporodnak, ami túlszaporodáshoz vezet.
- Gyakori átültetést igényelnek, ami növeli a genetikai instabilitás kockázatát, ami idővel hatással lehet a sejtek viselkedésére.
A SiHa sejtvonalak kutatási alkalmazásai
A SiHa sejtvonalat széles körben használják a méhnyakrák kutatásában. Itt néhány konkrét alkalmazását ismertetjük.
- A humán papillomavírussal (HPV) kapcsolatos kutatások: A SiHa sejtek HPV 16-pozitívak, ezért értékes modellek a humán papillomavírus-fertőzés, annak molekuláris mechanizmusai, valamint a méhnyakrák kialakulásában és progressziójában betöltött szerepének vizsgálatához. A kutatók ezeket a sejteket a vírus replikációjának, integrációjának, valamint a gazdasejt folyamatokra gyakorolt hatásának vizsgálatára is felhasználják. Egy 2020-ban végzett tanulmány a SiHa sejtvonalat használta annak vizsgálatára, hogy a HPV E6/E7 onkoproteinek milyen szerepet játszanak a méhnyakrák kialakulásában, amit a CRISPR-technológia segítségével céloztak meg. Az eredmények kimutatták, hogy az E6/E7 gének gátlása a SiHa sejtek növekedésének gátlását és apoptózist okozott. Ezért ezek a vírusgének kulcsfontosságú gyógyszercélpontként szolgálhatnak a HPV-vel összefüggő méhnyakrák elleni terápiák kifejlesztésében [3].
- Rákbiológia: A SiHa-sejtek felbecsülhetetlen értékű modellt jelentenek a méhnyakrák biológiájának tanulmányozásához, beleértve a rák kialakulását, progresszióját, metasztázisát és invázióját. A kutatók ezeket a sejteket használják a méhnyakrák kialakulásához és növekedéséhez hozzájáruló genetikai mutációk és alapul szolgáló molekuláris útvonalak feltárására; például egy tanulmányban SiHa-sejteket alkalmaztak, és megállapították, hogy a felfokozott SEC61G (SEC61 transzlokon gamma alegység) a MAPK-kaskád aktiválása révén elősegíti a méhnyakrákos sejtek szaporodását [4].
- Gyógyszerszűrés és -tesztelés: A SiHa egy széles körben használt méhnyakrák-sejtvonal, amely a HPV-vel összefüggő méhnyakrákra specifikus potenciális rákellenes gyógyszerek hatékonyságának értékelésére szolgál. A kutatók ezeket a sejteket felhasználva vizsgálják a gyógyszerek antiproliferatív, apoptotikus és metasztázisgátló hatását. Ilyen például egy 2019-ben végzett tanulmány, amely a Vatica diospyroides Symington Type SS gyümölcs kivonatainak citotoxikus hatását vizsgálta a SiHa méhnyakrákos sejtvonalon [5].
SiHa-sejtek a kutatásához!
A SiHa-sejteket bemutató kutatási publikációk
Számos jelentős és gyakran hivatkozott kutatási publikáció foglalkozik a SiHa méhnyak-pikkelyes karcinóma sejtvonalával.
Az OncoTargets and Therapy (2019) folyóiratban megjelent cikk szerint az aloe-emodin nevű természetes vegyület a SiHa méhnyakrákos sejtekben a HPV E6/E7 fehérjékhez és a glükózanyagcseréhez kapcsolódó apoptotikus hatásokat fejt ki.
Ez a cikk 2022-ben jelent meg a Future Journal of Pharmaceutical Sciences folyóiratban. A tanulmány az Excoecaria agallocha (L.) növény levélkivonatának daganatellenes hatását vizsgálta a SiHa méhnyakrákos sejtvonalon.
A Journal of Sol-Gel Science and Technology folyóiratban (2022) megjelent tanulmány szerint az 1,10-fenantrolin molekula cink-szulfát nanorészecskékhez kapcsolódva jelentős antiproliferatív hatást fejt ki a SiHa sejtekben.
Ezt a kutatást 2019-ben publikálták az Oncology Reports folyóiratban. A tanulmány kimutatta, hogy az astragalosid IV nevű természetes anyag a TGF-β1 által közvetített PI3K és MAPK jelátviteli útvonalak modulálásával gátolja a SiHa-sejtek migrációját és invázióját.
A Biomedicine & Pharmacotherapy folyóiratban (2020) megjelent tanulmány kimutatta, hogy az IFI16 (interferon-gamma által indukálható 16-os fehérje) a STING-TBK1-NF-kB jelátviteli út aktiválása révén szabályozza a PD-L1 gént, elősegítve ezzel a SiHa méhnyakrákos sejtek növekedését.
Források a SiHa sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
Íme néhány online forrás a SiHa sejtekkel kapcsolatban.
- SiHa sejtek transzfekciója: Ez a kutatási cikk tartalmaz egy protokollt a SiHa méhnyakrákos sejtek tenyésztésére és transzfekciójára vonatkozóan.
Az alábbi link a SiHa sejtek sejtkultúrájával kapcsolatos információkat tartalmazza.
- SiHa sejtvonal: Ez a weboldal számos értékes adatot tartalmaz a SiHa sejtvonalról. Ide tartoznak a tenyésztőközegre, a tenyésztési feltételekre, a SiHa sejtek szubkultiválására, valamint a proliferatív és kriokonzervált tenyészetek kezelésére vonatkozó protokollok.
GYIK a SiHa méhnyakrákos sejtekkel kapcsolatban
Hivatkozások
- Melzer, C., J. von der Ohe és R. Hass, Rövid áttekintés: a mezenchimális stroma/őssejtszerű sejtek és a ráksejtek közötti kölcsönhatás terápiás lehetőségeket kínál. Stem cells, 2018. 36(7): 951–968. o.
- Ostrowska, K.M. és munkatársai, A magas kockázatú humán papillomavírus méhnyakrákos sejtek biokémiai összetételére gyakorolt hatásának vizsgálata rezgésspektroszkópia segítségével. Analyst, 2010. 135(12): 3087–3093. o.
- Chen, Y. és munkatársai, Emberi méhnyakráksejtek in vitro és in vivo növekedésének gátlása a humán papillomavírus E6/E7 mRNS-einek CRISPR/Cas13a rendszer általi hasításával. Antiviral Research, 2020. 178: 104794. o.
- Fan, Y. és munkatársai: A SEC61G a MAPK jelátviteli út aktiválásával elősegíti a méhnyakrák szaporodását. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A. és munkatársai: A Vatica diospyroides symington SS típusú gyümölcs kivonatainak rákellenes potenciálja és hatása a méhnyakrákos sejtvonalak programozott sejthalálára. The Scientific World Journal, 2019. 2019.