G361 Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | G361 ist eine humane Melanomzelllinie, die aus einer metastatischen Stelle in der Haut eines erwachsenen Patienten stammt. Diese Zelllinie weist eine Melaninproduktion auf, die ein charakteristisches Merkmal von Melanozyten und Melanomzellen ist. G361-Zellen sind für ihre epithelähnliche Morphologie bekannt und werden häufig in der Forschung über Hautkrebs, insbesondere Melanom, eingesetzt. Die Zellen sind wertvoll für die Untersuchung der Biologie und Pathogenese des Melanoms, einschließlich Zellproliferation, Migration und Invasion. Darüber hinaus dienen sie als nützliches Modell für das Screening von Medikamenten und für das Verständnis der Mechanismen der Chemotherapieresistenz bei Melanomen. Die G361-Zelllinie wurde zur Erforschung der genetischen und molekularen Grundlagen des Melanoms verwendet. Sie hat bei Studien zur Untersuchung der Rolle verschiedener Onkogene und Tumorsuppressorgene bei der Krebsentstehung eine wichtige Rolle gespielt. So hat die Forschung mit G361-Zellen zum Beispiel zu Erkenntnissen über den MAPK/ERK-Signalweg beigetragen, der beim Melanom häufig gestört ist. Diese Zellen werden auch häufig in Tests zur Bewertung der Wirksamkeit neuer therapeutischer Wirkstoffe verwendet, was sie für die translationale Forschung und die Entwicklung gezielter Behandlungen des Melanoms von entscheidender Bedeutung macht. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Haut |
Krankheit | Melanom |
Synonyme | G-361, G361-mel, G361mel |
Merkmale
Alter | 31 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Europäisch |
Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | G361 (Cytion Katalognummer 302157) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Isoenzyme | G6PD, B |
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Produkte | Melanin |
Handhabung
Nährboden | McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiles Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820200a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | 1:2 bis 1:4 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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Benötigte Produkte
Eine herausragende Anwendung von McCoy's 5A Medium ist die Kultivierung menschlicher Kolon-Karzinom-Zelllinien. Insbesondere wurde es bei der Untersuchung des Leucin-reichen Repeat-enthaltenden G-Protein-gekoppelten Rezeptors (LGR5) und seiner Rolle bei der Metastasierung von Dickdarmkrebs eingesetzt. Dieses Medium hat sich bei der Kultivierung verschiedener Kolonkarzinom-Zelllinien wie HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b und TENN bewährt und ermöglicht es den Forschern, die der Metastasierung von Kolonkarzinomen zugrunde liegenden Mechanismen genauer zu erforschen.
Neben seiner Anwendung in der Krebsforschung hat sich McCoy's 5A Medium auch bei der Untersuchung von Osteoblasten als unverzichtbar erwiesen. Forscher, die die Ionenreaktivität von kalziumarmem Hydroxylapatit in Standard-Zellkulturmedien untersuchen, haben dieses Medium zur Kultivierung von Osteoblasten verwendet. Diese Anwendung hat zu einem besseren Verständnis der Wechselwirkungen zwischen Osteoblasten und kalziumarmem Hydroxylapatit geführt und zu Fortschritten auf dem Gebiet der Knochenforschung beigetragen.
McCoy's 5A Medium wurde sorgfältig formuliert, indem die im Basalmedium Eagle enthaltenen Aminosäuren modifiziert wurden, um Lebertumorzellen optimal zu unterstützen. Dank dieser angereicherten Formulierung eignet sich das Medium für eine Vielzahl etablierter Zelllinien sowie für Primärzellen, was seine Vielseitigkeit und Anwendbarkeit in verschiedenen Forschungsbereichen weiter erhöht.
Darüber hinaus geht die biochemische und physiologische Wirkung von McCoy's 5A Medium über Lebertumorzellen hinaus. Es wurde erfolgreich zur Unterstützung des Wachstums in Primärkulturen von Knochenmark, Haut, Zahnfleisch, Niere, Omentum, Nebenniere, Lunge, Milz, Rattenembryo und anderen Zelltypen eingesetzt. Diese breite Palette von Anwendungen beweist den großen Nutzen von McCoy's 5A Medium bei der Unterstützung des Wachstums und der Erhaltung verschiedener Zelltypen für umfassende biologische Forschung.
Formulierung
Dieses McCoy's 5A Medium (modifiziert) enthält 3,0 g/L Glucose, stabiles Glutamin, 2,0 mM Natriumpyruvat und 2,2 g/L NaHCO3.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid x 2H2O
132,46
Magnesiumsulfat x 7H2O
200,00
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
6,460.00
Natriumdihydrogenphosphat x H2O
580,00
Sonstige Bestandteile
D(+)-Galaktose wasserfrei
3,000.00
Glutathion (red.)
0,50
Bacto-Pepton
600,00
Phenolrot
10,00
Aminosäuren
L-Alanin
13,36
L-Arginin x HCl
42,10
L-Asparagin x H2O
45,00
L-Asparaginsäure
19,97
L-Cystein
24,24
L-Glutamin stabil
326,61
L-Glutaminsäure
22,10
Glycin
7,50
L-Histidin x HCl x H2O
20,76
L-Hydroxyprolin
19,70
L-Isoleucin
39,36
L-Leucin
39,36
L-Lysin x HCl
36,50
L-Methionin
14,90
L-Phenylalanin
16,50
L-Prolin
17,30
L-Serin
26,30
L-Threonin
17,90
L-Tryptophan
3,10
L-Tyrosin
18,10
L-Valin
17,60
Vitamine
p-Aminobenzoesäure
1,00
Ascorbinsäure
0,50
D(+)-Biotin
0,20
D-Calciumpantothenat
0,20
Cholinchlorid
5,00
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.